[发明专利]对伯氏疏螺旋体的新型抗病毒活性的鉴定

权利要求书

1.一种用于评估来自疏螺旋体属的细菌的生存力的方法，所述方法包括：

(a)建立细菌培养物，其包含从疏螺旋体属分离的细菌；

(b)用染色混合物孵育细菌培养物，所述染色混合物包含：(i)第一试剂，其发射第一颜色的荧光，指示培养物里的活细菌细胞，和(ii)第二试剂，其发射与第一颜色形成对比的第二颜色的荧光，并且指示培养物里的死亡的细菌细胞；

(c)计算第一颜色的发射荧光强度与第二颜色的发射荧光强度的比值；并且(d)评估培养物里的细菌的生存力，其中，(c)中所计算出的比值指示培养物里的活细菌的百分比。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一颜色是绿色，而所述第二颜色是红色或橙色。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，第一荧光试剂是SYBR Green I，并且第二荧光试剂是碘化丙啶。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，SYBR Green I以约0.1x至约100x的浓度存在于培养物中，并且碘化丙啶以约0.1mM至约5mM的浓度存在于培养物中。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，培养物中的SYBR Green I的浓度为10x，并且碘化丙啶的浓度为2mM。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述培养物还包含BSK-H培养基。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，将培养物与混合物一起孵育的步骤进行约15分钟。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，孵育的步骤在黑暗中进行。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述细菌为伯氏疏螺旋体。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述伯氏疏螺旋体包含选自以下组的形态形式：螺旋形式，原生质球形式，囊性或圆体形式，生物膜样和生物膜形式，以及它们的组合。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法以高通量方式实施。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述高通量方式使用至少一种多孔微板。

13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述多孔微板包括96孔板。

14.一种用于评估来自疏螺旋体属的细菌对至少一种抗生素的敏感性的方法，所述方法包括：

(a)建立细菌培养物，其包含从疏螺旋体属分离的细菌；

(b)在适于细菌生长的条件下孵育所述培养物，采用：

(i)至少一个剂量的至少一种抗微生物剂；和

(ii)染色混合物，包含：第一试剂，其发射第一颜色的荧光，指示培养物内的活细菌，和第二试剂，其发射与第一颜色形成对比的第二颜色的荧光，并且指示培养物内的死细菌；其中，第一颜色的发射荧光强度与第二颜色的发射荧光强度的比值指示培养物内活细菌的百分比；以及

(c)在暴露于至少一个剂量的至少一种抗微生物剂的一段时间后通过计算(b)(ii)中的比值来评估来自疏螺旋体属的细菌对至少一种抗生素的敏感性，其中，如果(b)(ii)中的比值在暴露于至少一个剂量的至少一种抗生素的一段时间之后保持相同或降低，那么所述细菌被评估为对至少一种抗生素是敏感的，并且，如果(b)中的比值在暴露于至少一个剂量的至少一种抗生素的该段时间之后增加了，那么所述细菌被评估为对至少一种抗生素是抗性的。

15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，还包括：确定对于所述至少一种抗生素的最小抑制浓度中断点。

16.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，第一颜色是绿色，第二颜色是红色或橙色。

17.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，第一荧光试剂是SYBR Green I，并且第二荧光试剂是碘化丙啶。

18.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，培养物中的SYBR Green I的浓度为10x，并且碘化丙啶的浓度为2mM。

19.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，所述培养物还包含BSK-H培养基。