[发明专利]糖尿病性肾病的早期预测标志物

说明书

本发明属于糖尿病性肾病预测的技术领域。

糖尿病的特征在于血液中异常高水平的葡萄糖。1型糖尿病(IDDM：胰岛素依赖性糖尿病)是由胰岛的胰脏β细胞的破坏引起的，通常导致绝对胰岛素缺乏。2型糖尿病(NIDDM：非胰岛素依赖性糖尿病)的特征在于异常胰岛素抗性，其可与胰岛素贫乏症相关。糖尿病性肾病(DN)是影响糖尿病患者的一种肾小球病变。DN影响约25-40％的1型或2型糖尿病患者，并且是这些患者终末期肾病(ESRD)的主要原因。糖尿病性肾病的特征在于肾小球滤过率的改变和尿中蛋白质的逐渐异常增加。微量白蛋白尿(尿白蛋白排泄约30-300毫克/24小时)是早期DN的第一个临床症状，并且已经是诊断DN的标准测试。微量白蛋白尿阶段可持续约10年。然后，尿白蛋白的量增加超过300毫克/24小时(大量白蛋白尿)，这表明明显的DN和ESRD增加的风险。

一些研究已经使用了差异蛋白质组学方法来搜索用于诊断DN的新标志物。通常，这样的研究基于患有DN的糖尿病患者的尿蛋白质组与对照受试者(健康受试者或无DN的糖尿病患者)的尿蛋白质组的比较。

Sharma等人的文章(《蛋白质组学》2005，5，2648-2655)使用二维差异凝胶电泳分析(2D DIGE)显示，与健康受试者相比，患晚期DN且具有大量白蛋白尿的糖尿病患者的尿样本中的α1抗胰蛋白酶(AAT)增加。

在另一项研究(Rao等人，《糖尿病护理》30：629-637，2007)中，通过蛋白质鉴定相关的2D DIGE，使用LC-MS/MS，将具有正常白蛋白尿、微量白蛋白尿或大量白蛋白尿的2型糖尿病患者的尿蛋白质组和对照受试者的尿蛋白质组进行比较。与正常白蛋白尿糖尿病患者相比，在DN大量白蛋白尿症患者中发现7种蛋白质以较高的相对丰度表达，4种蛋白质以较低的相对丰度表达。

Cho等人(《蛋白质组学的临床应用》2007，1，352-361)通过双向凝胶电泳(2D-GE)和ESI-Q-TOF MS/MS测试了具有正常白蛋白尿和具有微量白蛋白尿的2型糖尿病患者的血清蛋白质组。作者鉴定出一组18个蛋白质点，与正常白蛋白尿相比，在微量白蛋白尿患者中呈下调或上调，并且他们建议蛋白质DBP(维生素D结合蛋白)可能是2型DN的诊断标志物。

在Bellei等人的研究中(《蛋白质组学的临床应用》2008，2，478-491)，通过2D-GE分离以及随后进行的ESI-Q-TOF MS/MS鉴定，在患有2型糖尿病的正常白蛋白尿患者的尿中和患有DN并且相比健康受试者显示出微量白蛋白尿的2型糖尿病患者的尿中，可以发现不同表达的15种蛋白。

Afkarian等人(《分子与细胞蛋白质组学》9：2195-2204，2010)在取自健康志愿者的样本上进行基于iTRAQ(同位素标记相对和绝对定量技术)的蛋白质组学方法之前，实验了冷冻尿样本处理的不同方案。显示了在DN大量白蛋白尿患者和没有DN的糖尿病正常白蛋白尿患者之间差异表达的37种蛋白质的列表。

Jin等人(《实验糖尿病研究》，第2012卷，文章ID：168602)在正常白蛋白尿和微量白蛋白尿糖尿病患者中使用iTRAQ方法，鉴定出193种差异表达的蛋白质。在通过蛋白质印迹和MRM的选择和随后的验证之后，3种蛋白质(α1抗胰蛋白酶、α-1酸性糖蛋白1和前列腺干细胞抗原)被认为是DN的良好生物标志物。

Rossing等人(《美国肾脏病学会杂志》，2008)通过毛细管电泳-质谱(CE-MS)分析鉴定了在患有或不患有DN的糖尿病患者的尿中不同表达的一组生物标志物(主要是I型胶原蛋白的片段和尿调节素的片段)，并发现该组生物标志物允许区分患有微量白蛋白尿的糖尿病患者与向明显DN(即大量白蛋白尿)逐渐发展的糖尿病患者。因此，这样的生物标志物可以被认为是微量白蛋白尿患者是否患DN的预测标志物。然而，该出版物没有提供关于在正常白蛋白尿患者体内预测性标志物的数据。

由于在上述研究中鉴定的生物标志物仅在那些已经显示出尿白蛋白水平增加的患者体内观察到(即，当DN或至少DN的早期阶段已经形成时，才观察到差异表达)，因此，这些生物标志物只能引起诊断目的的兴趣，具体地确认DN的诊断，例如通过高水平的尿白蛋白的检测来确定。

然而，从这些研究中不能得出任何指示，表明这样的生物标志物在正常白蛋白尿患者DN发病方面的预测性价值。因此，仍然需要提供一种DN的早期预测标志物，其允许在没有显示任何异常白蛋白尿的糖尿病患者体内预测DN的发病。

一些先前的实验方法旨在鉴定DN预测的标志物：