[发明专利]用于生成戊二酸和戊二酸甲酯的方法

权利要求书

1.在重组宿主中生物合成戊二酸甲酯的方法，所述方法包括使用至少一种具有丙二酰基-CoA O-甲基转移酶活性的多肽和至少一种具有硫酯酶活性的多肽在所述宿主中将丙二酰基-[acp]和丙二酰基-CoA中的至少一种酶促转化为戊二酸甲酯。

2.权利要求1的方法，其中使用所述至少一种具有丙二酰基-CoA O-甲基转移酶活性的多肽将丙二酰基-[acp]酶促转化为丙二酰基-[acp]甲酯。

3.权利要求2的方法，其中使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将丙二酰基-[acp]甲酯酶促转化为戊二酰基-[acp]甲酯：合酶活性，脱氢酶活性，脱水酶活性，和还原酶活性。

4.权利要求3的方法，其中使用所述至少一种具有硫酯酶活性的多肽将戊二酰基-[acp]甲酯酶促转化为戊二酸甲酯。

5.权利要求1的方法，其中使用所述至少一种具有丙二酰基-CoA O-甲基转移酶活性的多肽将丙二酰基-CoA酶促转化为丙二酰基-CoA甲酯。

6.权利要求5的方法，其中使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将丙二酰基-CoA甲酯酶促转化为戊二酰基-CoA甲酯：合酶活性，β-酮硫解酶活性，脱氢酶活性，水合酶活性，和还原酶活性。

7.权利要求6的方法，其中使用所述至少一种具有硫酯酶活性的多肽将戊二酰基-CoA甲酯酶促转化为戊二酸甲酯。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述具有丙二酰基-CoA O-甲基转移酶活性的多肽与SEQ ID NO:21中列出的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。

9.权利要求3、4、或6-8中任一项的方法，其中所述具有还原酶活性的多肽与SEQ ID NO:19或20中列出的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。

10.权利要求1-9中任一项的方法，所述方法进一步包括使用至少一种具有羧酸还原酶活性的多肽在所述宿主中将戊二酸甲酯酶促转化为戊二酸半醛甲酯。

11.权利要求10的方法，其进一步包括使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将戊二酸半醛甲酯酶促转化为5-氨基戊酸：ω-转氨酶活性和酯酶活性。

12.权利要求11的方法，其进一步包括使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将5-氨基戊酸酶促转化为尸胺：羧酸还原酶活性，ω-转氨酶活性，N-乙酰基转移酶活性，醇脱氢酶活性，和脱乙酰基酶活性.

13.权利要求1的方法，所述方法进一步包括使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将戊二酸甲酯酶促转化为5-氧代戊酸：羧酸还原酶活性和酯酶活性。

14.权利要求13的方法，所述方法进一步包括使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将5-氧代戊酸酶促转化为尸胺：羧酸还原酶活性，和ω-转氨酶活性活性。

15.权利要求10的方法，所述方法进一步包括使用至少一种具有酯酶活性的多肽将戊二酸半醛甲酯酶促转化为5-羟基戊酸。

16.权利要求15的方法，其中所述具有酯酶活性的多肽与SEQ ID NO:16中列出的氨基酸序列具有至少70％序列同一性。

17.权利要求15或权利要求16的方法，其进一步包括使用至少一种具有脱氢酶活性的多肽将戊二酸半醛甲酯酶促转化为5-羟基戊酸。

18.权利要求15-17中任一项的方法，其进一步包括使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将5-羟基戊酸酶促转化为尸胺：羧酸还原酶活性，ω-转氨酶活性，和醇脱氢酶活性。

19.权利要求15-17中任一项的方法，其进一步包括使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将5-羟基戊酸酶促转化为1,5-戊二醇：羧酸还原酶活性和醇脱氢酶活性。

20.权利要求19的方法，其进一步包括使用至少一种具有选自下组的活性的多肽将1,5-戊二醇酶促转化为尸胺：ω-转氨酶活性和醇脱氢酶活性。

21.权利要求1-9中任一项的方法，所述方法进一步包括使用至少一种具有酯酶活性的多肽将戊二酸甲酯酶促转化为戊二酸。