[发明专利]表达异源性抗原融合蛋白的重组李斯特菌菌株及其使用方法

权利要求书

1.一种重组核酸分子，其包含编码重组多肽的开放读框，所述重组多肽包含融合至N末端李斯特菌溶血素O(LLO)多肽的异源性抗原，其中所述异源性抗原为存活素，其中所述核酸还包含可操作地连接至第一启动子序列的革兰氏阴性复制起点序列、革兰氏阳性复制起点序列和可操作地连接至第二启动子序列的编码代谢酶的开放读框。

2.根据权利要求1所述的重组核酸分子，其中所述核酸分子为DNA质粒。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的重组核酸分子，其中所述核酸分子包含SEQ ID NO:41。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的重组核酸分子，其中所述革兰氏阴性复制起点序列为p15序列。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的重组核酸分子，其中所述革兰氏阳性复制起点序列为Rep R序列。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的重组核酸分子，其中所述第一启动子序列为hly启动子序列。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的重组核酸分子，其中所述代谢酶为D-丙氨酸消旋酶。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的重组核酸分子，其中所述第二启动子序列为P60启动子序列。

9.一种重组李斯特菌，其包含权利要求1-8所述的核酸分子。

10.根据权利要求9所述的重组李斯特菌，其中所述李斯特菌在所述内源性dal/dat基因中包含突变。

11.根据权利要求8-10所述的重组李斯特菌，其中所述李斯特菌在所述内源性actA基因中包含突变。

12.根据权利要求8-11所述的重组李斯特菌，其中所述突变为缺失或失活。

13.根据权利要求9-12所述的重组李斯特菌菌株，其中所述重组李斯特菌菌株能够逃离所述吞噬溶酶体。

14.根据权利要求9-13所述的重组李斯特菌菌株，其中所述dal/dat突变由所述核酸分子编码的所述代谢酶补充。

15.根据权利要求9-14所述的重组李斯特菌菌株，其中所述重组李斯特菌菌株已经在动物宿主中传代。

16.根据权利要求9-15所述的重组李斯特菌菌株，其中所述重组李斯特菌菌株为重组单核细胞增多性李斯特菌菌株。

17.一种免疫原性组合物，其包含权利要求9-16所述的重组李斯特菌菌株和佐剂、细胞因子、趋化因子或它们的组合。

18.一种诱导受试者的抗存活素免疫应答的方法，所述方法包括施用权利要求9-16所述的重组李斯特菌或权利要求17所述的免疫原性组合物。

19.根据权利要求18所述的方法，其中所述重组李斯特菌菌株或所述免疫原性组合物经口或静脉内施用。

20.一种治疗、阻遏或抑制受试者的肿瘤或癌症的方法，其包括施用权利要求9-16所述的重组李斯特菌或权利要求15所述的免疫原性组合物。

21.根据权利要求20所述的方法，其中所述肿瘤或癌症为乳腺肿瘤或癌症、卵巢肿瘤或癌症、脑肿瘤或癌症、肺肿瘤或癌症、胃肠肿瘤或癌症、恶性毒瘤、胰腺肿瘤或癌症、淋巴瘤或它们的组合。

22.根据权利要求20-21所述的方法，其还包括施用强化剂量的所述重组李斯特菌或所述免疫原性组合物或其替代形式的步骤。

23.根据权利要求22所述的方法，其中所述免疫原性组合物的所述替代形式为编码包含融合至N末端李斯特菌溶血素O(LLO)多肽、N末端ActA多肽或PEST-肽的存活素抗原的重组多肽的DNA疫苗、包含融合至N末端李斯特菌溶血素O(LLO)多肽、N末端ActA多肽或PEST-肽的所述抗原的重组多肽，或编码所述重组多肽的病毒载体。

24.根据权利要求9-17中任一项所述的重组李斯特菌或免疫原性组合物用于诱导受试者的抗存活素免疫应答或用于治疗、阻遏或抑制受试者的表达存活素的癌症，或用于治疗、阻遏或抑制受试者的表达存活素的肿瘤的用途。

25.根据权利要求24所述的用途，其中所述李斯特菌或所述免疫原性组合物经口或静脉内施用。

26.根据权利要求25所述的用途，其中所述肿瘤或癌症为乳腺肿瘤或癌症、卵巢肿瘤或癌症、脑肿瘤或癌症、肺肿瘤或癌症、胃肠肿瘤或癌症、恶性毒瘤、胰腺肿瘤或癌症、淋巴瘤或它们的组合。