[发明专利]由HLA‑B7限制性肿瘤抗原衍生的优化的隐蔽性肽组成的免疫原性多肽及其用途

说明书

本发明涉及抗癌疫苗领域。更具体地，本发明涉及优化的嵌合多肽，用于HLA-B7癌症患者，所述嵌合多肽包含衍生自隐性肿瘤表位的四个优化的肽以增强其免疫原性。

目前开发中的抗肿瘤疫苗采取许多形式，包括游离肽、重组蛋白、装载有肽或肿瘤裂解物的树突状细胞和DNA。尽管基于肽的疫苗在可行性方面相对于其它形式非常有吸引力，但是发现靶向优势肿瘤肽的疫苗的许多研究仅引发弱的免疫学和临床应答，具有强的患者间变异性。在若干临床研究中所测试的来源于gp100的几种肽疫苗、在II期随机试验中测试的MUC1衍生的BLP25肽和在非常大量的I期和II期临床研究中测试的HER-2/neu衍生的E75肽，也是如此((Butts et al,2005；Peoples et al,2008；Rosenberg et al,2004)。

优化的隐性肽比转基因小鼠模型中的优势肽更有效地诱导抗肿瘤免疫(Gross et al,2004)，并且基于该技术的两种疫苗目前处于临床开发中：

-Vx-001，标明为NSCLC癌症HLA-A2患者的TERT衍生的单表位肽，处于IIb期，以及

-Vx-006，也被标明为HLA-A2患者的靶向TERT、MAGE-A和HER-2/neu通用肿瘤抗原的三表位多肽，处于I期。

使用基于多肽的疫苗引发针对多种抗原的CTL应答的方法具有几个优点。特别地，至少一种靶抗原的表达应当足以触发疫苗诱导的CTL从而杀死肿瘤细胞，并且肿瘤细胞不可能同时丢失所有靶抗原，特别是当这些抗原对于细胞存活和肿瘤生长是必需的时候。这种方法可以引起强烈的免疫应答(Oukka et al,1996)，并增加可能从疫苗中获益的患者比例。此外，广谱癌症疫苗应靶向被多种肿瘤过表达的通用肿瘤抗原，诸如TERT、HER-2/neu、MUC-1、CEA、EphA2和MAGE-A(Minev et al,2000；Ofuji et al,1998；Ogata et al,1992；Reese&Slamon,1997；Slamon et al,1987；Van den Eynde&van der Bruggen,1997；Vonderheide et al,1999)。这些抗原中的大多数参与肿瘤细胞存活和致瘤性，因此它们下调以逃避免疫应答可能对肿瘤生长具有有害作用。

为了增加可以从这样的产品中受益的患者的数量，本发明人已经开发了命名为Vbx-016的指定给表达HLA-B7的患者的基于多肽的疫苗，其靶向四种广泛表达的肿瘤抗原：TERT、HER-2/neu、MAGE和CEA。已经描述了构成Vbx-016的四种优化的隐蔽肽(表1)(WO2008/010098、WO2010/143010)。四种肽中的每一种均显示在体内和体外(WO2008/010098、WO2010/143010)引发针对优化的肽和针对肿瘤细胞天然表达的天然同源肽两者的抗肿瘤应答(表1)。有趣的是，由MAGE-A_273V6L9引发的CTL靶向六种MAGE-A抗原(-A1、-A2、-A3、-A4、-A6和-A12)。事实上，使用MAGE-A_273V6L9诱导的特异性CTL能够识别负载有MAGE-A₂₇₃A6(包括在MAGE-A1和MAGE-A4中)、MAGE-A₂₇₃I6(包括在MAGE-A2和MAGE-A6中)和MAGE-A₂₇₃V6(包括在MAGE-A3和MAGE-A12中)的细胞。

表1：天然的和优化的表位序列

通常，在皮下注射之前，将基于多肽的疫苗用佐剂诸如Montanide ISA51VG(Seppic，Castres，France)乳化。注射后，多肽被内化到专业抗原呈递细胞(APC)中，特别是局部存在于皮肤中的朗格汉斯细胞。然后，多肽由高尔基体中的蛋白酶体加工，并且表位与HLA分子相关联被呈递在细胞表面。为了确保多肽的每个表位的有效呈递，必须测试每个连接(junction)是否被蛋白酶体正确加工。此外，本发明人先前已经描述了对于Vx006三表位多肽，多表位疫苗序列中各表位的顺序对于表位加工和最终获得针对所有相应表位的免疫应答是至关重要的(WO2007/073768)。

然后，为了避免测试24个推断的排列，在两个步骤中确定多肽中四个优化的肽的最佳构造：(i)测试每个连接序列；和(ii)测试相应的完整多肽。

因此测试每个潜在的连接。然后就表2中所呈现的十二种可能的二肽在HLA-B*0702转基因小鼠中体内测试并在健康供体PBMC培养物中体外测试以下能力：