[发明专利]人类乳头瘤病毒构建体

说明书

政府资助

本发明是在美国国家卫生研究院颁布的授权号为CA098252的政府资助下完成的。政府享有本发明中的某些权力。

优先权

本PCT申请主张2014年6月19日提交的美国临时申请No.62/014,495的优先权。为了各种目的该申请作为一个整体通过引用而并入本文中。

发明领域

本发明的实施方式为预防、治疗和/或诊断人类乳头瘤病毒感染及与此相关的宫颈癌提供新型疫苗和诊断试剂。本文中一些实施方式涉及没有标签、跟踪剂或融合元素的人类乳头瘤病毒(HPV)构建体。这些制品能够用于在受试者中诱发对目标HPV的免疫反应。在某些实施方式中，由本文中揭示的组合物和方法生成的HPV构建体是壳粒。

背景技术

乳头瘤病毒是能够感染多种不同种类的动物(包括人类在内)的致病性病毒。乳头瘤病毒感染的特征通常表现为诱发上皮和纤维上皮肿瘤，或者位于感染位点的疣。每个种类的脊椎动物都可以被一组物种特异性的乳头瘤病毒感染。例如，迄今为止，已分离了超过100种不同的人类乳头瘤病毒基因型。乳头瘤病毒是高度物种特异性的感染性试剂。尚未确认犬和兔乳头瘤病毒会在异源物种(如人类)体内诱发乳头瘤。抗一种乳头瘤病毒型感染的免疫力通常似乎不会赋予抗另一种类型的免疫力，即使这些类型的乳头瘤病毒感染同源物种时。

乳头瘤病毒诱发生殖器疣，这是一种流行性人类性传播疾病。HPV6型和11型通常多与良性的生殖器疣尖锐湿疣存在联系。生殖器疣非常普遍，并且相比于临床感染，亚临床的或不明显的HPV感染甚至更加普遍。尽管多数HPV诱发的病变是良性的，由某种乳头瘤病毒类型(如HPV-16和HPV-18)诱发的病变可能经历恶性进展，从而可能导致宫颈癌。涉及宫颈癌的HPV基因型中，HPV-16是最常见的，在大约50％的宫颈癌中都有发现。

鉴于普遍由乳头瘤病毒感染造成的重大的健康风险，特别是人类乳头瘤病毒感染，许多团队已经报告了重组乳头瘤病毒抗原的进展及作为诊断试剂和预防性疫苗的用途。一般而言，这些研究集中在制造含有单独的主要衣壳蛋白(L1)或与次要衣壳蛋白(L2)组合的预防性疫苗。

目前临床试验的预防性疫苗是基于VLPs(病毒样颗粒)。VLPs是72个五聚体或主要乳头瘤病毒衣壳蛋白L1的壳粒的集合体。然而，这些类型的疫苗的生产比较昂贵，因为需要真核表达系统或复杂的纯化，并且不如壳粒制品稳定。VLP疫苗不能提供针对其它乳头瘤病毒血清型的交叉保护，因为中和免疫反应倾向于类型特异性占主导。

发明概述

本文中揭示的实施方式提供没有亲和性或其它标签的人类乳头瘤病毒(HPV)壳粒，病毒衣壳的亚单位的有效组合物和生产方法，其中该构建体是无标签的。根据这些实施方式，可以采用本文中揭示的组合物和方法，从任何HPV物种生成该HPV壳粒。

在其它实施方式中，本文中生成的HPV蛋白或多肽可以用于生成在所描述的免疫原性组合物中使用的壳粒。根据这些实施方式，本文中揭示的实施方式中的壳粒可以用于以成本效率高的、高效的和稳定的方式生产用于使受试者免疫的免疫原性组合物，从而降低HPV感染的发病或发展的风险或者治疗患有HPV感染的受试者。

一些实施方式涉及使用产生HPV-蛋白的构建体来生成相比于标准方法大量的蛋白，同时消除了移除标签或融合分子的需要，使这一过程更加有效率。这些无标签构建体可以用来形成在本文中揭示的免疫原性组合物中使用的壳粒。本文中考虑的某些免疫原性组合物可以是药学上可以接受的组合物，这些组合物是用来生成疫苗的免疫原性组合物或用来使受试者对乳头瘤感染免疫的其它组合物。这些组合物可以用来在受试者中诱发对人类乳头瘤病毒的免疫反应以保护受试者免于HPV感染。描述了由本文中揭示的组合物产生的用来预防和/或治疗病毒性感染(如乳头瘤病毒感染、宫颈癌和与此相关的疣)的预防性疫苗。也揭示了组合物中使用的编码乳头瘤病毒构建体或多肽的核酸和表达载体。

在一些实施方式中，用本文中揭示的方法生成的构建体可以用来在细菌表达系统中表达HPV多肽以快速和成本效率高地生成和纯化大量HPV多肽。根据这些实施方式，用这些方法生产的HPV多肽可以被用于药物组合物或其它组合物中。因为这些HPV多肽没有被融合或者不包含标签或其它跟踪分子，所以不需要进一步处理。