[发明专利]将核酸包封在脂质纳米粒主体中的方法

权利要求书

1.将核酸包封在脂质纳米粒主体中以提供包封核酸纳米粒的方法，该方法包括：

提供两个核酸流，所述两个核酸流各自包含核酸在第一水性溶液中的混合物，并且一起具有大于或等于3至14米/秒的复合线速度；

提供一个脂质流，所述一个脂质流包含一种或多种脂质在有机溶剂中的混合物，并且具有1.5至4.5米/秒的线速度；

将所述的一个脂质流与所述的两个核酸流在装配为交叉连接器的第一交汇点混合，其中所述两个核酸流从相反方向以彼此180°进入所述交叉连接器，并且所述一个脂质流以相对于所述两个核酸流90°进入所述交叉连接器，得到第一混合流；

使第一混合流以与所述一个脂质流相同的方向和以相对于所述两个核酸流90°以第一个方向流出所述交叉连接器；和

混合所述第一混合流的组分，得到包含包封核酸纳米粒的第一出口溶液；

其中所述第一水性溶液和所述有机溶剂是可溶混的，所述第一水性溶液或所述有机溶剂中的一个含有缓冲液，并且所述第一出口溶液中的有机溶剂浓度小于33％。

2.权利要求1的方法，其中:

所述第一水性溶液为包含碱金属盐水性溶液的第一缓冲溶液；和

所述有机溶剂包含醇性溶剂。

3.权利要求1的方法，还包括：

用选自第二种缓冲溶液和水的稀释溶剂稀释所述第一混合流，其中所述第二种缓冲溶液含有至少一种碱金属盐，得到第一出口流；

其中所述碱金属盐选自NaCl和柠檬酸钠中的一种或多种。

4.权利要求1的方法，其中：

所述一个脂质流的线速度在3至4米/秒之间；和

所述两个核酸流的复合线速度在9至14米/秒之间。

5.权利要求3的方法，其中用稀释溶剂稀释所述第一混合流包括：

提供稀释流，所述稀释流包含选自第二种缓冲溶液和水的水性溶剂；和

将所述第一混合流与所述稀释流合并，得到第一出口流；

其中所述一个脂质流的线速度在3至4米/秒之间；和所述两个核酸流的复合线速度在6至8米/秒之间。

6.权利要求1的方法，还包括：

培养所述第一出口溶液，得到经培养的第一出口溶液；

用选自第三种缓冲溶液和水的第二稀释溶剂稀释经培养的第一出口溶液，得到第二出口溶液；和

将所述第二出口溶液进行浓缩和透析，得到经浓缩的、经透析的溶液。

7.权利要求6的方法，其中所述浓缩包括通过切向流过滤进行浓缩。

8.权利要求7的方法，还包括将经浓缩的、经透析的溶液进行无菌过滤。

9.权利要求1的方法，其中所述核酸为siRNA。

10.权利要求1的方法，其中所述核酸为mRNA。

11.权利要求1的方法，其中所述脂质纳米粒主体包含一种或多种选自下表的脂质：

12.权利要求1的方法，其中所述包封核酸纳米粒具有30nm至80nm的平均粒度直径。

13.权利要求1的方法，其中所述包封核酸纳米粒具有40nm至70nm的平均粒度直径和小于0.1的多分散指数，其通过动态光散射测定。

14.权利要求1的方法，该方法还包括：

培养所述第一出口溶液，得到经培养的第一出口溶液；和

用选自第三种缓冲溶液和水的第二稀释溶剂稀释经培养的第一出口溶液，得到第二出口溶液；

其中脂质:核酸的质量比为15-20:1；所述两个核酸流中的核酸浓度为0.1至1.5mg/mL，并且所述一个脂质流中的脂质浓度为10至25mg/mL；和所述第二出口溶液中的乙醇浓度为10-15％。