[发明专利]稀释生物样品成分的分析方法有效
申请号: | 201580051060.9 | 申请日: | 2015-07-06 |
公开(公告)号: | CN107076728B | 公开(公告)日: | 2020-07-31 |
发明(设计)人: | 大泽进;杉本晋哉;米久保功 | 申请(专利权)人: | 立佳有限公司 |
主分类号: | G01N33/48 | 分类号: | G01N33/48;G01N33/49 |
代理公司: | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人: | 任梅;郑霞 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 稀释 生物 样品 成分 分析 方法 | ||
1.一种血液样品中的分析物的定量分析方法,所述方法是在用稀释用缓冲液稀释样品并对血液中的分析物进行定量的方法中包括使用内标物和外标物计算血液样品的稀释倍数,其中所述方法包括,内标物以规定浓度添加到稀释用缓冲液中,外标物是在血液样品中恒定地以规定浓度含有的成分,所述稀释用缓冲液中不含有对内标物和外标物的定量产生干扰的成分,对用稀释用缓冲液稀释的血液样品中的内标物浓度与外标物浓度进行测定,并根据这些测定值计算血液样品的稀释倍数,以及通过使用所述外标物浓度的测定值对由所述内标物浓度的测定值求得的血液样品的稀释倍数进行校正,从而对所述血液样品中的分析物进行定量分析,其中所述内标物是具有不渗透到血细胞中的性质的内标物,选自由麦芽糖、谷氨酸、亮氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、4-羟基苯、羟基丁酸、肌酸、苹果酸、Trinder试剂和属于碱金属类或碱土金属类的元素所组成的组,所述外标物选自由钠、氯、白蛋白和总蛋白构成的组,并且所述血液样品在稀释后被除去血细胞或者所述血液样品是血浆。
2.根据权利要求1所述的定量分析方法,其中,内标物为属于碱金属类或碱土金属类的元素。
3.根据权利要求1或2所述的定量分析方法,其中,内标物为锂,外标物为钠。
4.根据权利要求2所述的定量分析方法,其中,稀释用缓冲液含有选自由2-氨基-2-甲基-1-丙醇、2-乙基氨基乙醇、N-甲基-D-葡糖胺、二乙醇胺和三乙醇胺构成的组的氨基醇化合物,以及含有选自由HEPES即2-[4-(2-羟乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸、TES即N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸、MOPS即3-吗啉丙磺酸和BES即N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸构成的组的缓冲剂作为缓冲剂成分,且具有pH6.5~pH8.0的缓冲作用。
5.根据权利要求4所述的定量分析方法,其中,稀释用缓冲液实质上不含钠和氯。
6.根据权利要求1所述的定量分析方法,其中,微量血液样品的稀释倍数由下述计算式(1)~(4)中任一个计算式进行计算,对稀释血浆中的分析物进行定量,乘以用计算式(1)~(4)中任一个求得的稀释倍数,从而对原血浆中的分析物进行定量:
计算式(1)
计算式(2)
计算式(3)
X=a×(B+D)±b (3)
其中,a和b为系数,预先获取B+D与稀释倍数的数据,制作以X=a×(B+D)±b表示的标准曲线;
以及
计算式(4)
X=A/B' (4)
其中,B'=(A×D)/C,
上述各式中,A、B、C、D、B'及X定义如下:
A:添加有内标物的缓冲液中内标物的吸光度
B:稀释血浆中内标物的吸光度
C:血浆中外标物浓度的正常中位值的吸光度
D:稀释血浆中外标物的吸光度
B':由外标物的吸光度计算出的稀释倍数而得到的稀释血浆中内标物的吸光度的校正值
X:血浆稀释倍数
其中,稀释血浆是指用稀释用缓冲液稀释血液样品并除去血细胞而得到的血浆。
7.根据权利要求1所述的定量分析方法,所述方法利用β-半乳糖苷酶的酶活性随钠离子浓度而变化,从而能够由β-半乳糖苷酶的吸光度变化量对钠离子浓度进行定量,用下述方法对作为用稀释用缓冲液稀释的血液样品中外标之一的钠进行测定:
用稀释用缓冲液稀释生物样品,进一步用纯水稀释,以稀释样品量的10~30倍体积量添加含β-半乳糖苷酶的缓冲液即第一试剂,在30~45℃下加温2~20分钟,以第一试剂量的半量添加含邻硝基苯基-β-D-吡喃半乳糖苷的底物溶液即第二试剂,在主波长410nm、副波长658nm处测定生成的邻硝基苯酚的吸光度。
8.根据权利要求1所述的定量分析方法,所述稀释用缓冲液实质上不含钠和氯。
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