[发明专利]具有抗原和作为佐剂的白细胞介素‑21的疫苗

说明书

相关申请的引证

本申请要求2014年10月1日提交的美国临时申请号62/058,304的优先权，所述临时申请以引用方式并入本文。

技术领域

本发明涉及包含抗原和IL-21的疫苗以及施用所述疫苗的方法。

背景技术

疫苗用于刺激个体的免疫应答，以提供针对特定疾病的保护和/或对特定疾病的治疗。一些疫苗包含诱导免疫应答的抗原。一些抗原引起强免疫应答，而其他抗原引起弱免疫应答。通过在疫苗中包含佐剂可以加强对抗原的弱免疫应答。佐剂以很多不同形式出现，例如铝盐、油乳剂、细菌或其他病原体的无菌成分、细胞因子等。

细胞因子是由影响其他细胞行为的细胞形成的蛋白质，并且与很多佐剂不同的是它们可以调节特异性免疫应答。一种所述细胞因子是白细胞介素-21(IL-21)，其对淋巴和骨髓群体以及上皮细胞施加作用，调节先天和适应性免疫应答。已显示IL-21有助于几种CD4+T细胞亚群的功能性分化，以促进CD8+T细胞的增殖和功能应答，并在B细胞免疫球蛋白应答的发展中发挥作用。IL-21由CD8+T细胞群体以及CD4+T细胞群体(包括滤泡辅助T(TFH)细胞、17型辅助T(Th17)细胞和天然杀伤T(NKT)细胞)产生。

还以许多不同方式(例如，注射、口服等)将疫苗施用到许多不同的组织(例如，肌内、皮内等)中。然而，并非所有的递送方法都是等效的。一些递送方法允许在个体群体内的更大顺从性，而其他递送方法可影响疫苗的免疫原性和/或安全性。因此，在本领域中仍然需要开发安全的和更有效的佐剂，所述佐剂增加抗原应答而与抗原的身份(identity)和施用途径无关。

发明内容

本发明涉及包含抗原和IL-21的疫苗。IL-21可由选自由以下组成的组的核苷酸序列编码：与如SEQ ID NO:3中所列出的核苷酸序列具有至少约95％同一性的核苷酸序列，以及如SEQ ID NO:3中所列出的核苷酸序列。IL-21可由如SEQ ID NO:3所列出的核苷酸序列编码。

抗原可由第一核酸编码，并且IL-21可由第二核酸编码。第二核酸还可包含表达载体。疫苗还可包含与以上抗原具有相同编码核酸序列的抗原肽，以及与以上IL-21具有相同编码核酸序列的IL-21肽。

抗原可选自由以下组成的组：人乳头瘤病毒(HPV)抗原、人免疫缺陷病毒(HIV)抗原、流感抗原、恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)抗原、艰难梭菌(C.difficle)抗原以及其片段。HPV抗原可选自由以下组成的组：HPV16E6抗原、HPV16E7抗原以及其组合。HIV抗原可选自由以下组成的组：Env A、Env B、Env C、Env D、B Nef-Rev、Gag以及其任何组合。流感抗原可选自由以下组成的组：H1HA、H2HA、H3HA、H5HA、BHA抗原以及其任何组合。恶性疟原虫抗原可以包括环子孢子(CS)抗原。艰难梭菌抗原可选自由以下组成的组：毒素A、毒素B以及其组合。

疫苗可还包含药学上可接受的赋形剂。

本发明还涉及用于增加有需要的受试者中的免疫应答的方法。所述方法可包括施用包含抗原和IL-21的疫苗。IL-21可由选自由以下组成的组的核苷酸序列编码：与如SEQ ID NO:3中所列出的核苷酸序列具有至少约95％同一性的核苷酸序列，以及如SEQ ID NO:3中所列出的核苷酸序列。IL-21可由如SEQ ID NO:3中所列出的核苷酸序列编码。

施用疫苗可包括电穿孔。增加受试者中的免疫应答可包括增加受试者中的细胞免疫应答、体液免疫应答或细胞免疫应答和体液免疫应答两者。

本发明还涉及包含选自由以下组成的组的一种或多种核苷酸序列的核酸分子：SEQ ID NO:3，以及与SEQ ID NO:3 95％或更大相同的核苷酸序列。核酸分子可以是质粒。

附图说明

图1示出质粒pVAX-mIL-21Opt的图，所述质粒包含编码小鼠IL-21的优化核酸。

图2示出IL-21在来自转染HEK 293T细胞的上清液中的表达。

图3示出使用B细胞ELISpot测定通过肌内途径用编码来自艰难梭菌的毒素A和毒素B抗原的质粒免疫的小鼠中的体液免疫应答。

图4示出使用ELISA测定通过肌内途径免疫的小鼠中的体液免疫应答。

图5示出使用干扰素γELISpot测定通过肌内途径用编码来自HIV的EnvA和EnvC抗原的质粒免疫的小鼠中的细胞免疫应答。