[发明专利]编码人无调同源物‑1(HATH1)的腺病毒载体

说明书

相关申请的交叉参考

本发明要求2014年10月9日提交的美国临时专利申请号62/061,748的权益，所述文献通过引用的方式并入作为参考。

通过参考并入的电子方式递交的材料

通过引用方式完整并入本文的是与之同时提交并标识如下的计算机可读取核苷酸/氨基酸序列表：一份2015年9月25日创建的名为“721767_ST25.TXT”的49,240比特ASCII(文本)文件。

发明背景

世界大部分人群或许在其一生中将经历某种听力下降或平衡障碍。大约17％(三千六百万)美国成人报告了某种程度的听力损失，并且在美国每1,000名儿童约2-3名出生就耳聋或听力不佳(来自美国国家耳聋和其他交流障碍研究院(NIDCD)的统计结果)。

在听到和平衡时，机械刺激由感觉毛细胞转换成神经信号，损伤所述感觉毛细胞是许多类型听力损失和平衡障碍的原因。例如高噪声所致的机械损伤使耳蜗毛细胞弯折到毛细胞不能再转导信号至听神经的程度。由于哺乳动物毛细胞天然不再生，如果毛细胞受损，则能出现永久性听力损失。除了作为听力受损主要原因的声学创伤以外，听力损失还可以由遗传综合征、细菌或病毒性感染、使用处方药和老年性耳聋(与老龄相关的听力损失)引起。同样地，平衡障碍，特别地前庭障碍，可以由感染、头部损伤、使用药物和年龄引起。

听力损失的最常见治疗包括助听器和耳蜗植入物。全球大约188,000人已经接受耳蜗植入物，这包括在美国的大约41,599名成人和25,500名儿童(NIDCD统计结果)。平衡障碍的治疗选项包括平衡再训练、抗眩晕或抗恶心药物和前庭康复治疗。然而如果这种障碍为渐进性，则或许将在延长的时间段范围内需要这类疗法，并且平衡障碍的许多疗法不提供永久缓解头晕。目前，不存在针对涉及耳内感觉毛细胞损失或损伤的病症的有效药物治疗。

因此，仍需要可以改善与感觉毛细胞破坏或损失相关的病症如听力损失和平衡障碍的药剂。本发明提供这种药剂。

发明简述

本发明提供一种腺病毒载体，所述腺病毒载体包含血清型5腺病毒基因组，但是在所述血清型5腺病毒基因组中VA RNA I区两个碱基对缺失，E1区的一个或多个内源核苷酸缺失以造成E1区中的内源性基因功能上缺损，E3区的一个或多个内源核苷酸缺失，并且E4区的一个或多个内源核苷酸缺失以造成E4区中的内源性基因功能上缺损，其中右侧反向末端重复序列(ITR)、E4区聚腺苷酸化序列和E4区启动子保留，(b)SV40早期聚腺苷酸化序列，(c)编码包含SEQ ID NO:1的人无调同源物-1(human atonal homolog-1；Hath1)蛋白的核酸序列，(d)人胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)启动子，和(e)转录惰性间隔子(TIS)。元件(b)、(c)和(d)在腺病毒基因组的E1区中相对于腺病毒基因组按3’至5’的顺序存在，并且其中元件(e)位于病毒基因组的E4区中，在E4聚腺苷酸化序列和E4启动子之间。

本发明还提供利用前述腺病毒载体在人内耳中产生感觉细胞的组合物和方法。

附图简述

图1是质粒pAdE1(GFAP.Hath1)E3(10)E4(TIS1)的示意图。

图2是腺病毒载体AdGFAP.HATH1.11D的示意图。

发明详述

本发明至少部分地基于以下发现：通过向内耳递送血清型5腺病毒载体能产生感觉毛细胞，所述载体包含编码人无调同源物-1(Hath1)蛋白的核酸序列。

如本文所用，术语“腺病毒载体”，指一种腺病毒，其中腺病毒基因组已经过操作以容纳相对于腺病毒基因组而言非天然的核酸序列。一般地，通过以下方式产生腺病毒载体：向腺病毒的腺病毒基因组中引入一个或多个突变(例如，缺失、插入或置换)，从而容纳非天然核酸序列插入腺病毒中。