[发明专利]使用色谱分离富集来检测分析物的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本专利申请要求2014年10月7日提交的美国临时专利申请62/060,618的优先权，该专利申请的公开内容全文以引用方式并入本文。

背景技术

在一些情况下，检测复杂基质(如，食物、创伤流出物、唾液、痰、粪便)中的特定细胞(如，微生物)可能较为困难，因为基质包含与检测系统的一种或多种组分干扰的物质(如，生物分子、酶、化学品、离子)。因此，操作人员通常使用各种方法来降低基质中所发现物质的抑制作用。一种降低基质效应的方法是稀释含基质的样本，以降低抑制物质的浓度。然而，此方法可限制测试的总体检测灵敏度。

降低样本基质效应的另一种方法是使用免疫磁性分离(IMS)来隔离和/或净化所关注的细胞，如Chen等人在“Automated immunomagnetic separation for the detection of Escherichia coli O157:H7from spinach”(用于检测菠菜中大肠杆菌O157:H7的自动免疫磁性分离，2014年，国际食品微生物学杂志，179:33-37)中对此有所描述。该方法已经得到普及，因为该方法已被自动化以消除需要操作人员干预来实现从基质材料有用地分离靶细胞的步骤。此外，使用IMS方法已得到改进的检测灵敏度。

尽管在样本制备中有进步，仍然需要用于制备样本以检测分析物(例如，与靶细胞相关联的分析物)的简单、快速的方法。

发明内容

一般来讲，本公开涉及用于检测靶分析物(例如，与特定细胞、特定微生物或微生物群的存在相关联的分析物)的方法和装置。具体地讲，本公开涉及使用色谱分离装置在色谱分离装置内的预定位置处富集靶分析物，并随后从装置释放预定位置和/或靶分析物。在从装置释放预定位置和/或靶分析物之后，可以使用本领域已知的各种检测过程中的一种或多种来检测和任选地识别细胞。有利的是，本公开的方法和装置相对于非靶分析物和可以其它方式干扰靶分析物的检测的其它颗粒或分子来富集靶分析物。此外，通过该方法实现的富集提供了靶分析物的检测的增加的灵敏度，特别是当靶分析物以低浓度存在于样本中时。

在一个方面，本公开提供了检测靶微生物的第一方法。该方法可包括使液体样本接触样本制备装置的多孔载体，所述装置包括具有第一开口和第二开口的壳体以及多孔载体。多孔载体包括位于第一预定位置处的样本接收区和位于第二预定位置处的靶分析物结合区，多孔载体限定从样本接收区延伸穿过靶分析物结合区的第一流体通路。第二流体通路穿过壳体从第一开口延伸到第二开口，该第二流体通路在靶分析物结合区与多孔载体相交。第一方法还可包括：允许液体样本的至少一部分从样本接收区朝向靶分析物结合区纵向移动穿过多孔载体；在液体的至少一部分移动到靶分析物结合区之后，迫使脱离构件穿过第二流体通路从第一开口到达第二开口，并从而排出靶分析物结合区的一部分；以及处理靶分析物结合区的该部分或从其释放的细胞，以检测靶微生物的指示。

在另一方面，本公开提供了检测靶微生物的第二方法。该方法可包括使液体样本接触样本制备装置的多孔载体，所述装置包括具有第一开口和第二开口的壳体，以及多孔载体。多孔载体包括位于第一预定位置处的样本接收区和位于第二预定位置处的靶分析物结合区，多孔载体限定从样本接收区延伸穿过靶分析物结合区的第一流体通路。第二流体通路穿过壳体从第一开口延伸到第二开口，该第二流体通路在靶分析物结合区与多孔载体相交。第二方法还可包括：允许液体样本的至少一部分从样本接收区朝向靶分析物结合区纵向移动穿过多孔载体；在液体的至少一部分移动到靶分析物结合区之后，迫使靶释放溶液穿过第二流体通路，并从而从装置中排出包含靶微生物(如果存在于第二流体通路中)的靶释放溶液的一部分；以及处理释放溶液的该部分以检测靶微生物的指示。

在第一方法和第二方法的上述实施方案中的任一个中，在液体的至少一部分移动到靶分析物结合区之后，该方法还可包括使洗涤溶剂经由第二流体通路穿过多孔载体的步骤。在第一方法和第二方法的上述实施方案中的任一个中，方法还可包括邻近第二开口定位接收器，其中排出靶分析物结合区的一部分或排出释放溶液的一部分进一步包括将靶分析物结合区的该部分或释放溶液的该部分移动到接收器中。