[发明专利]结核分枝杆菌蛋白

说明书

本发明涉及结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis(M.tuberculosis)蛋白及其免疫活性片段(肽或模拟表位肽)。具体地，本发明涉及一组结核分枝杆菌蛋白及其肽，其具有高度抗原性并且是结核分枝杆菌临床菌株特有的。因此，本发明进一步涉及这些结核分枝杆菌蛋白或肽在诊断、治疗或预防结核分枝杆菌复合体感染中的用途。

技术领域

本发明涉及结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis(M.tuberculosis)蛋白及其免疫活性片段(肽或模拟表位肽)。具体地，本发明涉及一组结核分枝杆菌蛋白及其肽，其具有高度抗原性并且是结核分枝杆菌临床菌株特有的。因此，本发明进一步涉及这些结核分枝杆菌蛋白或肽在诊断、治疗或预防结核分枝杆菌复合体感染中的用途。

背景技术

结核病是由结核分枝杆菌Mycobacterium tuberculosis(M.tuberculosis)复合体的成员引起的普遍传染病。大多数结核分枝杆菌复合体感染是无症状或潜伏的。然而，约十分之一的潜伏性感染最终会发展为活动性疾病(通常为肺结核)，如果不进行治疗，其对超过50％个体是致命的。

结核分枝杆菌复合体感染的有效实验室诊断是控制结核病传播的一个关键方面。此外，快速和可靠的诊断能够允许及时实施正确治疗方案。

传统上，已经通过使用显微镜检查(使用酸快杆菌(AFB)染色)或微生物培养在体液中展示分枝杆菌来诊断结核分枝杆菌复合体感染。然而，样本必须含有高浓度的分枝杆菌(即5至10000/ml)，以便得到可靠的显微镜检查，且基于培养的诊断是缓慢的。

诊断结核分枝杆菌复合体感染的新方法涉及检测与感染相关的免疫应答。与其他分枝杆菌一样，结核分枝杆菌刺激CD4+和CD8+T细胞以及其他免疫细胞，以引发强烈的1型促炎样反应，包括分泌细胞因子如干扰素(IFN)-γ和肿瘤坏死因子TNF)-d。IFN-γ释放测定(IGRAs)可用于检测这种迟发型超敏反应(DTH)应答。IGRAS所基于的原则为：致敏(感染)个体的T细胞在再次遇到结核分枝杆菌抗原时产生IFN-γ。用于结核分枝杆菌的市售IGRAs包括原始的QuantiFERON-TB及其增强型QuantiFERON-TB Gold和QuantiFERON-TB GoldIn-Tube测定(Cellestis International，Carnegie，Australia)，酶联免疫斑点(ELISPOT)T SPOT-TB测定(Oxford Immunotec，Oxford，United Kingdom)和各种兽医专业设备(Prionics，Schlieren-Zurich，Switzerland)。这些IGRAs的显著优点是它们对结核分枝杆菌复合体感染的特异性较高。这是它们通过使用在差异区(RD)1编码的特异性结核分枝杆菌抗原实现的，所述差异区是在卡介苗(BCG)疫苗和大多数环境分枝杆菌中不存在的基因组片段。IGRAs中使用的RD1抗原包括ESAT6和CFP10。尽管基于对这些抗原的免疫应答的诊断是有效的，但是仍然需要开发用于诊断测试的新的替代抗原。例如，重要的是，用于诊断测试中的抗原不同于在疫苗中使用的抗原，以避免在接种的受试者中获得假阳性结果。特别是ESAT6，其具有被包含在结核分枝杆菌疫苗中的潜力。当然，也可将有效的新抗原用于疫苗中，以预防或治疗结核分枝杆菌复合体感染。

发明内容

本发明人令人惊讶地鉴定了在结核分枝杆菌的诊断测试中特别有用的许多结核分枝杆菌抗原及其片段。所鉴定的抗原含有分别与人白细胞抗原(HLA)分子或抗体有效结合的许多T细胞和/或B细胞表位。因此，所述抗原和片段可用于检测抗结核分枝杆菌免疫应答，从而确定个体中是否存在结核分枝杆菌复合群感染。抗原和片段还能够在个体中诱导免疫应答，因此可以用于预防性或治疗性疫苗接种。