[发明专利]用于两向RPLC-SFC色谱的系统和方法

说明书

提供了用于分离和/或分析有机化合物的复杂混合物的两向色谱系统和方法。具体地，描述了两向反相液相色谱(RPLC)‑超临界流体色谱(SFC)系统，其包括在界面上采集从第一方向色谱中洗脱的分析物、同时使得RPLC流动相通过的捕集柱。来自RPLC维度柱(dimension column)的感兴趣的峰被有效地聚焦为捕集柱上的尖锐浓度脉冲，随后将被注入到第二维度SFC柱上。该系统可用于药物化合物的同时非手性和手性分析。第一维度RPLC分离提供非手性纯度结果，且第二维度SFC分离提供手性纯度结果(对映体过量)。

相关申请的交叉参考

本申请要求2014年10月27日提交的美国临时专利申请号62/069,219的优先权，将该文献的公开内容以其完整的形式并入本文作为参考。

发明领域

本发明涉及用于正交分离和分析化合物的混合物的多维色谱系统和方法。公开了示例性的两向反相液相色谱-超临界流体色谱系统及其使用方法。

发明背景

色谱法广泛应用于分离和分析化合物的混合物。由于单向色谱法的峰容量限制，所以已经发明了具有增加的峰容量的多维色谱系统用于分析复杂的样品。两向(2D)色谱技术尤其是在分析复杂的混合物中已经成为极为普遍的。与单向(1D)色谱法相比，2D色谱技术具有更高的选择性和分辨能力，推定保留机制是互补的。当各个分离的选择性独立时(正交)，实现了在两向分离系统中的最大峰容量，使得在单向中难以分辨的成分可以在第二维度上得到完全分辨。如果正交分离机制用于两向，则该系统的理论峰容量为各个峰容量的乘积。参见Giddings，J.C.Ana 1.Chem.1984，56：1258A；Giddings，J.C.：Cortes，H.J.(Ed.)，MultidimensionalChromatogra-phy：Techniques和Applications，Marcel Dekker，New York1990，p.1；Jandera，P.等人，Chromatographia 2004，60：S27。

然而，对于2D色谱在灵敏度和溶剂兼容性方面存在一些限制。例如，从第一维度上携带的流动相通常产生对第二维度的干扰，由此限制了第二维度的分离能力。用于第一维度和第二维度的溶剂的不兼容性可以导致严重的带分散或增宽和峰衰退，由此对界面设计提出了巨大的挑战。Tian，H.，等人，J.Chroma togr.A 2006，1137：42。为了缓解溶剂的不混溶性担忧，研究人员已经研发了几种在两个维度上使用兼容性流动相的2D系统。一些实例包括如下：2D反相液相色谱(RPLC x RPLC)(Venkatramani，C.J.等人，J.Sep.Sci.2012，35：1748；Zhang，J.等人，J.Sep.Sci.2009，32：2084；Song，C.X.等人，Ana1.Chem.2010，82：53；Liu，Y.M.等人，J.Chromatogr.A 2008，1206：153)、2D亲水性相互作用液相色谱(HILICxRPLC)(Liu，Y.M.等人，J.Chromatogr.A 2008，1208：133；Wang，Y.等人，Ana1.Chem.2008，80：4680；Louw，S.等人，J.Chroma togr.A 2008，1208：90)、2D正相液相色谱x超临界流体色谱(NPLC x SFC)(Gao，L.等人，J.Sep.Sci.2010，33：3817)和2D SFC x SFC(Zeng，L.等人，J.Chromatogr.A2011，1218：3080；Lavison，G.等人，J.Chromatogr.A 2007，1161：300；Hirata，Y.等人，J.Sep.Sci.2003，26：531；Okamoto，D.等人，Ana1.Sci.2006，22：1437；Guibal，P.等人，J.Chromatogr.A 2012，1255：252)。Anderer等人的US 2013/0134095公开了2D LC系统和方法，它们尝试通过控制与第二LC状态相关的将第一LC的输出量注入第二LC的注射结果来进一步减少第一LC对第二LC的干扰。