[发明专利]筛选干扰分子的方法

权利要求书

1.一种筛选干扰核酸方法，所述干扰核酸增加：

-基因表达和/或

-基因和/或从所述基因转录的核糖核酸的活性，

所述干扰核酸与所述基因或所述RNA具有至少部分序列互补性，并且

所述方法包括将杂合核酸分子，特别是能够进行RNA干扰的，引入真核细胞的步骤，所述杂合核酸分子包括：

-用于启动翻译的第一非编码序列，

-与待筛选的所述干扰核酸的序列至少部分互补的第二序列，

-编码至少一种确定肽的第三核苷酸序列，所述第三序列处于第一序列的顺式翻译控制下，所述第一序列被修饰，通过取代、缺失或添加至少一个核苷酸，使得所述至少一种肽的翻译水平相对于在其未修改、特别优选形式的所述第一序列控制下的所述至少一种肽的翻译水平降低至少10％。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述杂合核酸分子包括位于所述第三序列上游的所述第一序列。

3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述核酸分子是任选地包含在载体中的脱氧核糖核酸，特别是双链的分子，或核糖核酸分子，特别是单链的分子。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第一序列是其未修饰形式、由以下列序列表示的Kozak序列：

5'-ssmRccA(T/U)GG-3'(SEQ ID NO:1)

其中R表示嘌呤，s表示G或C，和m表示A/U或C。

5.根据权利要求1、2或3中任一项所述的方法，其中所述第一序列是Kozak序列，所述Kozak序列包含以其修饰形式的以下序列或由以下序列组成：SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：NO：5中的一个。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述第二序列包含与所述干扰核酸的序列至少部分互补的18至10,000个核苷酸。

7.一种杂合核酸分子，其包含：

-用于启动翻译的第一非编码序列，

-与至少一个干扰核酸至少部分互补的第二序列，

-编码至少一种确定肽的第三核苷酸序列，所述第三序列处于第一序列的顺式翻译控制下，

所述第一序列被修饰，通过取代、缺失或添加至少一个核苷酸，使得所述至少一种肽的翻译水平相对于在其未修改、特别优选形式的所述第一序列控制下的所述至少一种肽的翻译水平降低至少10％。

8.如权利要求7所述的杂合核酸分子，所述核酸分子选自具有以下序列的分子：SEQ ID NO：116，SEQ ID NO：117，SEQ ID NO：118，SEQ ID NO：119，SEQ ID NO：120，SEQ ID NO：121，SEQ ID NO：122，SEQ ID NO：123，SEQ ID NO：124，SEQ ID NO：125，SEQ ID NO：126，SEQ ID NO：127和SEQ ID NO:128。

9.一种包含至少一个如权利要求7或权利要求8所述的杂合核酸分子的真核细胞。

10.一种试剂盒，其包括：

-权利要求7或权利要求8所述的至少一种核酸分子，和

-至少一种真核细胞和/或用于由所述杂合核酸分子转化真核细胞的装置。

11.一种中间杂合核酸分子，其包括：

-如权利要求1所定义的用于启动翻译的第一非编码序列，

-编码至少一种确定肽的第三核苷酸序列，如权利要求1所定义，所述第三序列是在第一序列的顺式翻译控制下，

和至少一个用限制酶切割的位点，使得插入核酸分子具有与干扰核酸互补的序列，

所述第一序列被修饰，通过取代、缺失或添加至少一个核苷酸，使得所述至少一种肽的翻译水平相对于在其未修改、特别优选形式的所述第一序列控制下的所述至少一种肽的翻译水平降低至少10％。

12.如权利要求7、或权利要求8、或11所述的至少一种核酸分子，其用于筛选干扰核酸分子，其增加基因表达，和/或基因和/或从所述基因转录的核糖核酸的活性。