[发明专利]重组克氏锥虫JL7抗原变体及其用于检测查加斯病的用途

说明书

本发明涉及适合于检测分离的生物样品中针对克氏锥虫(引起查加斯病)的抗体的JL7抗原的变体。这些抗原包含JL7特异性氨基酸序列，所述JL7特异性序列由两个拷贝的SEQ ID NO.2组成，其中所述两个拷贝中的每一个与SEQ ID NO.2具有至少90％的氨基酸同一性，并且其中所述多肽中不存在进一步的克氏锥虫特异性氨基酸序列。本发明还涉及可用于检测针对克氏锥虫的抗体的多肽的组合物，其包含上述表征的JL7抗原连同克氏锥虫多肽1F8、Cruzipain、KMP‑11和PAR‑2中的至少一种。此外，其涉及用于产生JL7抗原的方法以及用于使用JL7多肽检测克氏锥虫抗体的诊断方法。此外，本发明涉及包含所述JL7多肽或克氏锥虫多肽的组合物的试剂盒。

技术领域

本发明涉及重组克氏锥虫JL7抗原变体及其用于检测查加斯病的用途。

背景技术

克氏锥虫（Trypanosoma cruzi）是引起被称为查加斯病的热带寄生虫病的鞭毛虫原生动物。在查加斯病过程中，受感染的患者通常通过急性期，随后为慢性期，其具有介于温和和威胁生命之间的不同症状。只有在初期阶段，患者才能对抗寄生虫治疗有响应。一些患者发生导致死亡的心脏或肠道并发症。

克氏锥虫通常通过昆虫载体(即锥猎蝽亚科(subfamily Triatominae)(猎蝽科(family Reduviidae)，德文：“Raubwanzen”)的吸血“亲吻虫”)传播给人类和其他哺乳动物。该疾病也可通过输血和器官移植、摄入被寄生虫污染的食物而传播以及从母亲传播到胎儿。为了防止查加斯病的进一步传播，重要的是基于血液中的寄生虫的存在和针对克氏锥虫的抗体筛选献血和医疗产品，特别是在主要感染的区域，如墨西哥、中南美洲和美国南部。

如今，几种血清学诊断方法可用来检测克氏锥虫的感染，例如，通过间接免疫荧光、间接血细胞凝集、补体固定、免疫印迹技术和ELISA检测针对克氏锥虫的抗体。还应用分子生物学方法(例如PCR)和复杂的媒介生物诊断方法。在媒介生物诊断法中，使载体传播的感染物，实验室培育的、无病原体昆虫(此处为：接吻虫)从患者吸取血液。然后检查昆虫的肠内容物中病原体(此处为：克氏锥虫)的存在。

这些方法中的每一种在灵敏度和特异性方面都显示出其自身的弱点和优势，因此目前还没有可用的金标准方法。

在开始开发查加斯测定法用于检测抗体中，应用了且仍正在使用天然抗原裂解物。然而，使用裂解物，在该抗原组合物中仅代表克氏锥虫的三个发育阶段之一，使得存在错过其他两个阶段的感染的特定可能性。更现代的测定法应用代表克氏锥虫感染的所有阶段的重组抗原的混合物。

用于检测针对克氏锥虫抗原的抗体的血清学测定已经在现有技术文献中广泛描述。例如Silveira等人 (Trends in Parasitology 2001, Vol. 17 No. 6, p. 286-291)描述了已经由几个实验室分离了与血清诊断相关的克氏锥虫重组抗原。这些基因中的几个具有串联重复的序列，得到显示重复的氨基酸序列基序的蛋白。

在用于检测针对克氏锥虫的抗体的血清学测定中广泛使用的抗原之一是JL7，UniProt数据库条目号Q4CS87，其也通过同义词FRA、Ag1和H49描述(对于综述，参见例如Cotrim等人 1995, Mol Biochem Parasitol 71, 89-98和Umezawa等人 1999, J ClinMicrobiol, 1554-1560)。Silveira等人(同上)也描述了用于ELISA测定中的各种额外的克氏锥虫抗原的几种混合物中的FRA (JL7)。没有公开特定JL7相关多肽。

Valiente-Gabioud等人(Exp. Parasitol. 2011, 127, p. 672-679)讨论了重复性对克氏锥虫FRA(JL7)蛋白的免疫原性和抗原性的影响。建议使用四个重复的重复以得到令人满意的来自人受感染血清的ELISA信号。没有解决测定特异性的问题，并且没有公开特定JL7多肽。