[发明专利]用于制备细胞结合剂‑细胞毒性剂缀合物的方法

权利要求书

1.一种用于制备细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)使细胞毒性剂与由以下结构式表示的双功能交联试剂：

或其盐在包含缓冲剂的缓冲溶液中反应，以提供包含细胞毒性剂-接头化合物的第一混合物，其中所述缓冲溶液具有高缓冲能力；

(b)使从步骤(a)获得的所述第一混合物中的所述细胞毒性剂-接头化合物与细胞结合剂在pH为4至9的溶液中反应，以提供包含所述细胞结合剂细胞毒性剂缀合物的第二混合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述细胞结合剂易于片段化。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述细胞毒性剂是美登木素生物碱。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述细胞毒性剂是DM4。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂与所述双功能交联试剂的摩尔比是1.5:1至12.5:1。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述缓冲剂与所述双功能交联试剂的所述摩尔比是2:1至8:1。

7.如权利要求5所述的方法，其中所述缓冲剂与所述双功能交联试剂的所述摩尔比是4:1至6:1。

8.如权利要求5所述的方法，其中所述缓冲剂与所述双功能交联试剂的所述摩尔比是5:1。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述缓冲溶液具有4至9的pH。

10.如权利要求9所述的方法，其中所述缓冲溶液具有7.5至8.5的pH。

11.如权利要求10所述的方法，其中所述缓冲溶液具有7.9至8.5、8.0至8.4或8.1至8.3的pH。

12.如权利要求9所述的方法，其中所述缓冲溶液具有8.2的pH。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂选自由以下组成的组：柠檬酸盐缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂和磷酸盐缓冲剂。

14.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述缓冲剂选自由以下组成的组：HEPPSO(N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-(2-羟基丙磺酸))、POPSO(哌嗪-1,4-双-(2-羟基-丙烷-磺酸)脱水物)、HEPES(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸)、EPPS(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-丙磺酸)、TES(N-[三(羟甲基)甲基]-2-氨基乙磺酸)、MES(2-(N-吗啉代)乙磺酸)及其组合。

15.如权利要求14所述的方法，其中所述缓冲剂是EPPS。

16.如权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述缓冲溶液还包含氯化钠。

17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述缓冲溶液还包含有机溶剂。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述有机溶剂是DMA。

19.如权利要求17或18所述的方法，其中所述有机溶剂以所述缓冲溶液的1体积％-99体积％、50体积％-99体积％、60体积％-99体积％或70体积％-99体积％的量存在。

20.如权利要求19所述的方法，其中所述有机溶剂以所述缓冲溶液的50体积％-90体积％、55体积％-85体积％、60体积％-80体积％或65体积％-75体积％的量存在。

21.如权利要求19所述的方法，其中所述有机溶剂以所述缓冲溶液的70体积％的量存在。

22.如权利要求1-21中任一项所述的方法，其中在步骤(a)的所述反应中使用相对于所述双功能交联试剂摩尔过量的量的所述细胞毒性剂。

23.如权利要求22所述的方法，其中所述细胞毒性剂与所述双功能交联试剂的摩尔比是1.1:1至20:1、1.1:1至10:1、1.1:1至5:1或1.1:1至2:1。

24.如权利要求23所述的方法，其中所述细胞毒性剂与所述双功能交联试剂的所述摩尔比是1:1:1至1.3:1。