[发明专利]用于复合单细胞核酸分析的基于微滴的方法和设备

权利要求书

1.一种包含多个寡核苷酸装饰的珠的混合物，其中所述珠各自包含：

(a)连接体；和

(b)连接至所述连接体的寡核苷酸，其中所述寡核苷酸包含：

(i)用作测序引发位点的序列，其中所述序列在所有珠上相同；

(ii)珠条形码寡核苷酸序列；

(iii)对于各引发位点不同的独特分子标识；

(iv)用于捕获聚腺苷酸化mRNA和启动反转录的寡核苷酸冗余序列；和

(v)任选地至少一个另外的寡核苷酸序列，其提供用于下游分子-生物反应的基质；

其中所述珠条形码寡核苷酸序列对于任一个珠上的所有引发位点是相同的，但不同于所有其他珠上的所述珠条形码寡核苷酸序列，并且其中用作所述珠条形码寡核苷酸序列的序列是与用作所述独特分子标识的序列相连续的。

2.根据权利要求1的混合物，其中所述珠条形码寡核苷酸序列的长度范围为4-1000个核苷酸。

3.根据权利要求1的混合物，其中所述用于捕获聚腺苷酸化mRNA和启动反转录的寡核苷酸冗余序列是寡聚dT序列。

4.根据权利要求1的混合物，其中所述连接体是不可切割的直链聚合物。

5.根据权利要求1的混合物，其中所述连接体是可化学切割的直链聚合物。

6.根据权利要求1的混合物，其中所述连接体是不可切割的任选取代的烃聚合物。

7.根据权利要求1的混合物，其中所述连接体是光不稳定的任选取代的烃聚合物。

8.根据权利要求1的混合物，其中所述连接体是聚乙二醇。

9.根据权利要求1的混合物，其中所述连接体是PEG-C₃至PEG-₂₄。

10.根据权利要求1的混合物，其包含至少一个寡核苷酸序列，该寡核苷酸序列提供用于下游分子-生物反应的基质。

11.根据权利要求10的混合物，其中所述下游分子-生物反应是用于成熟mRNA的反转录；捕获转录组的特定部分、DNA聚合酶和/或相似酶的启动；或在整个转录组或基因组中启动。

12.根据权利要求1的混合物，其中所述另外的寡核苷酸序列包含寡聚dT序列。

13.根据权利要求1的混合物，其中所述另外的寡核苷酸序列包含引物序列。

14.根据权利要求1的混合物，其中所述另外的寡核苷酸序列包含寡聚dT序列和引物序列。

15.根据权利要求1的混合物，其中所述珠配置成用于对连接至所述珠的条码标记的cDNA进行PCR扩增。

16.根据权利要求1至15中任一项的混合物，其中所述珠的材料选自甲基丙烯酸酯类、聚苯乙烯类、聚丙烯酰胺类和聚乙二醇类。

17.根据权利要求1至16中任一项的混合物，其中所述珠的材料能够用于有机合成。

18.根据权利要求1至17中任一项的混合物，其中所述珠的材料是多孔的。

19.根据权利要求1至18中任一项的混合物，其中所述珠的材料是甲基丙烯酸酯树脂。

20.根据权利要求19的混合物，其中所述甲基丙烯酸酯树脂是孔尺寸为100nm的羟基化甲基丙烯酸聚合物。