[发明专利]用于核苷酸类似物的改善的掺入的经修饰的聚合酶

权利要求书

1.重组DNA聚合酶，其包含与SEQ ID NO:10至少60％、70％、80％、90％、95％、99％相同的氨基酸序列，所述重组DNA聚合酶包含在一个或多个位置处的至少一个氨基酸取代突变，所述位置在功能上等同于9°N DNA聚合酶氨基酸序列中的Thr144、Gly153、Lys476、Leu478、Thr590、Ala639或Asp718。

2.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Thr144处的所述取代突变包含突变为非极性氨基酸。

3.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Thr144处的所述取代突变包含与Thr144Ala、Thr144Gly、或Thr144Leu同源的突变。

4.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Gly153处的所述取代突变包含突变为极性氨基酸。

5.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Gly153处的所述取代突变包含与Gly153Asp同源的突变。

6.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Lys476处的所述取代突变包含突变为疏水性氨基酸。

7.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Lys476处的所述取代突变包含与Lys476Trp同源的突变。

8.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Leu478处的所述取代突变包含突变为极性氨基酸。

9.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Leu478处的所述取代突变包含与Leu478Ser、Leu478Arg、或Leu478Thr同源的突变。

10.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Thr590处的所述取代突变包含突变为非极性氨基酸。

11.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Thr590处的所述取代突变包含与Thr590Ile、或Thr590Gly同源的突变。

12.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Ala639处的所述取代突变包含与Ala639Val，或Ala639Phe同源的突变。

13.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Asp718处的所述取代突变包含突变为不带电荷的氨基酸。

14.权利要求1的改变的聚合酶，其中位置Asp718处的所述取代突变包含与Asp718Asn同源的突变。

15.权利要求1的改变的聚合酶，其中所述聚合酶是DNA聚合酶。

16.权利要求1的改变的聚合酶，其中所述DNA聚合酶是家族B型DNA聚合酶。

17.权利要求16的改变的聚合酶，其选自下组：家族B古细菌(archael)DNA聚合酶、人DNA聚合酶-α、T4、RB69、和phi29噬菌体DNA聚合酶。

18.权利要求17的改变的聚合酶，其中所述家族B古细菌DNA聚合酶来自选自下组的属：热球菌属(Thermococcus)、焦球菌属(Pyrococcus)、和甲烷球菌属(Methanococcus)。

19.权利要求17的家族B古细菌DNA聚合酶，其选自下组：Vent、Deep Vent、9°N、和Pfu聚合酶。

20.权利要求19的改变的聚合酶，其中所述家族B古细菌DNA聚合酶是9°N聚合酶。

21.权利要求1-20中任一项的改变的聚合酶，其中所述改变的聚合酶进一步包含在与所述9°N DNA聚合酶氨基酸序列中的Leu408和/或Tyr409和/或Pro410在功能上等同的位置处的取代突变。

22.权利要求21的改变的聚合酶，其中所述改变的聚合酶包含与所述9°N DNA聚合酶氨基酸序列中的Leu408Ala和/或Tyr409Ala和/或Pro410Ile同源的取代突变。

23.权利要求1-22中任一项的改变的聚合酶，其中所述改变的聚合酶包含与野生型聚合酶相比降低的外切核酸酶活性。

24.权利要求23的改变的聚合酶，其中所述改变的聚合酶包含在与所述9°N DNA聚合酶氨基酸序列中的Asp141和/或Glu143在功能上等同的位置处的取代突变。