[发明专利]用于生物合成罗汉果苷化合物的方法和材料

权利要求书

1.能够在细胞培养物中产生罗汉果醇前体、罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的重组宿主细胞，其包含：

(a)编码能够从角鲨烯合成氧化角鲨烯或环氧角鲨烯之多肽的基因，其中所述能够从角鲨烯合成氧化角鲨烯或环氧角鲨烯的多肽由SEQ ID NO：54所示的氨基酸序列构成；

(b)编码能够从氧化角鲨烯合成葫芦二烯醇，或者从环氧角鲨烯合成24,25环氧葫芦二烯醇之多肽的基因，其中所述能够从氧化角鲨烯合成葫芦二烯醇，或者从环氧角鲨烯合成24,25环氧葫芦二烯醇的多肽由SEQ ID NO：43所示的氨基酸序列构成；

(c)编码能够从葫芦二烯醇合成24,25环氧葫芦二烯醇，或者从11-羟基-葫芦二烯醇合成11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇之多肽的基因，其中所述能够从葫芦二烯醇合成24,25环氧葫芦二烯醇，或者从11-羟基-葫芦二烯醇合成11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇的多肽由SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列构成；

(d)编码能够从葫芦二烯醇合成11-羟基-葫芦二烯醇，或者从24,25环氧葫芦二烯醇合成11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇之多肽的基因，其中所述能够从葫芦二烯醇合成11-羟基-葫芦二烯醇，或者从24,25环氧葫芦二烯醇合成11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇的多肽由SEQ ID NO：44所示的氨基酸序列构成；

(e)编码能够从11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇合成罗汉果醇之多肽的基因，其中所述能够从11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇合成罗汉果醇的多肽由SEQ ID NO：74所示的氨基酸序列构成；

(f)编码能够还原细胞色素P450复合物之多肽的基因，其中所述能够还原细胞色素P450复合物的多肽由SEQ ID NO：46所示的氨基酸序列构成；以及

(g)编码能够从11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇合成所述罗汉果苷前体之多肽的基因，其中所述能够从11-羟基-24,25环氧葫芦二烯醇合成所述罗汉果苷前体的多肽由SEQ IDNO：38或40所示的氨基酸序列构成；

所述重组宿主细胞还包含以下的一种或更多种：

(h)编码能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C3羟基处将其糖基化之多肽的基因，其中所述能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C3羟基处将其糖基化的多肽由SEQ ID NO：62或68或22所示的氨基酸序列构成；

(i)编码能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C24羟基处将其糖基化之多肽的基因，其中所述能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C24羟基处将其糖基化的多肽由SEQ ID NO：21、23、24、25、22、48或68中任一个所示的氨基酸序列构成；

(j)编码能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C3羟基处和C24羟基处将其糖基化之多肽的基因，其中所述能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C3羟基处和C24羟基处将其糖基化的多肽由SEQ ID NO：22或68所示的氨基酸序列构成；

(k)编码能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C11羟基处将其糖基化之多肽的基因，其中所述能够在所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的C11羟基处将其糖基化的多肽由SEQ ID NO：24所示的氨基酸序列构成；

(l)编码能够使所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的24-O-葡萄糖的C2’位β-1,2糖基化之多肽的基因，其中所述能够使所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的24-O-葡萄糖的C2’位β-1,2糖基化的多肽由SEQ ID NO：50、53或72中任一个所示的氨基酸序列构成；和/或

(m)编码能够使所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的3-O-葡萄糖和/或24-O-葡萄糖的C2’位β-1,2糖基化和/或C6’位β-1,6糖基化之多肽的基因，其中所述能够使所述罗汉果苷前体和/或罗汉果苷化合物的3-O-葡萄糖和/或24-O-葡萄糖的C2’位β-1,2糖基化和/或C6’位β-1,6糖基化的多肽由SEQ ID NO：53或72所示的氨基酸序列构成；

其中至少一种所述基因是重组基因。

2.权利要求1所述的重组宿主细胞，其包含基因(a)-(g)和(h)-(m)。

3.权利要求1或2中任一项所述的重组宿主细胞，其中所述重组宿主细胞已被修饰成减少羊毛甾醇合酶(ERG7)多肽的表达。