[发明专利]原始肠内胚层细胞及其制作方法

权利要求书

1.原始肠内胚层细胞的制作及扩增方法，其包括：从多能性干细胞、在饲养细胞非存在下、

经如下阶段分化：

在第1阶段，在Rock抑制物的存在下培养，

在第2阶段，在激活素A及Wnt3a的存在下培养，

在第3阶段，在BMP4、bFGF、VEGF及激活素A的存在下培养，

在第4阶段，在BMP4、bFGF、VEGF及激活素A的存在下培养；

之后实施至少1次以上传代；

在传代后的第1阶段或传代初日，在Rock抑制物的存在下培养；及

其后在SFD、5～10ng/ml的FGF2、8～20ng/ml的VEGF、10～40ng/ml的EGF、0.1～1μM的A83-01及1～5μM的Chir99021的存在下培养。

2.通过权利要求1所述的方法得到的原始肠内胚层细胞，其中

作为未分化多能性细胞标志物的NANOG，OCT4，MYC，LIN28A是阴性，

作为内胚层细胞标志物的CXCR4，CER1，HHEX，GATA4是阴性，

作为肠内胚层细胞标志物的CDX2，HOXB9是阳性，

此外，

作为间充质细胞标志物的Brachyury(T)是阴性，

作为胰腺细胞标志物的PDX1是阴性，且

所述细胞至少可分化为肝细胞、胰腺细胞及肠细胞。

3.器官细胞的制作方法，其包括将权利要求2所述的原始肠内胚层细胞向器官细胞分化诱导。

4.将权利要求2所述的原始肠内胚层细胞在任意的阶段冷冻－保存并构建用于制造器官细胞的工作细胞库的方法。