[发明专利]培养容器以及培养容器的制造方法

说明书

本发明可以提供能够以高于以往的效率使淋巴细胞活化的培养容器及其制造方法。本发明是用于使淋巴细胞活化的由软包装材料制成的袋状的培养容器，在相面对的容器内面的一面以10～300ng/cm²的密度固相化有抗CD3抗体，并且以每1cm²由所述一面构成的培养面中0.25～400ng且0.1～800μl的量封入了溶液状的抗CD3抗体。另外，在由软包装材料制成的袋状的培养容器中，以所述密度将抗CD3抗体固相化在相面对的容器内面的一面，以所述的量封入溶液状的抗CD3抗体。

技术领域

本发明涉及一种细胞的培养技术，特别涉及用于使淋巴细胞活化的培养容器及其制造方法。

背景技术

近年来，在医药品的生产、基因治疗、再生医疗、免疫疗法等领域中，要求在人工环境下高效地大量培养细胞或组织、微生物等。

在这样的状况下，向由透气性膜形成的培养容器中封入细胞和培养液，在封闭系统中自动地大量培养细胞。

特别是在培养淋巴细胞的情况下，在用于增加细胞数的培养之前，首先需要使用抗CD3抗体进行用于使淋巴细胞活化的培养。为此，向加入了抗CD3抗体的培养容器中加入淋巴细胞和培养液，进行其活化。

但是，在向培养容器中仅加入了少量的溶液状的抗CD3抗体的情况下，对淋巴细胞的刺激就会不充分，无法充分地进行活化。另一方面，在向培养容器中大量地加入了溶液状的抗CD3抗体的情况下，会因细胞的防御机理而使存在于细胞膜中的CD3抗原脱落，淋巴细胞的活化受到阻碍。

以抗CD3抗体作为主成分的免疫抑制剂是着眼于这样的淋巴细胞的性质而创造的物质，当将其对在内脏器官·组织移植后产生排斥反应的患者施用时，大量的抗CD3抗体与抗原结合而集聚，该集聚物被引入细胞内后向细胞外排出。或者，集聚物由酶切断，从细胞表面除去抗原。其结果是，刺激不会被传递到细胞内，淋巴细胞的活化受到抑制。

如此所述，很难使用游离在溶液中的抗体恰当地控制淋巴细胞的活化，以往，一般广泛进行的是，将抗CD3抗体固相化在培养容器的底内面，使用这样的培养容器适度地刺激淋巴细胞，由此将淋巴细胞活化。

另外，在制造淋巴细胞的活化用培养袋(以下有时简称为活化培养袋)时，在向培养袋内封入含有抗CD3抗体的抗体溶液而使抗CD3抗体固相化在培养袋内面后，清洗培养袋内而除去游离抗体，其后封入淋巴细胞和培养液而进行活化培养。通过像这样清洗培养袋内而除去游离抗体，就可以更加有效地进行淋巴细胞的活化。

现有技术文献

特許文献1：日本特开2007－175028号公报

发明内容

发明所要解决的问题

因而，本发明人等为了调查在活化培养袋中残存有抗体溶液时的游离抗体对活化的不良影响，使用各种浓度的抗体溶液，进行了淋巴细胞的活化。

其结果是发现，令人惊奇的是，虽然在抗体浓度是活化培养袋的制造中所用的程度的较高浓度的情况下，淋巴细胞的活化受到抑制，然而在某个一定范围的低浓度的情况下，淋巴细胞的活化反而得到促进。

即，通过将抗CD3抗体固相化在活化培养袋中，并且封入低浓度的游离抗体，可以促进由活化培养袋造成的淋巴细胞的活化，其结果是，判明可以进一步提高淋巴细胞的增殖效率。

此处，专利文献1的实施例1中记载，为了制造淋巴细胞的活化培养袋，向培养袋内封入含有抗CD3抗体的抗体溶液而使抗CD3抗体固相化在培养袋内面后，在保持封入抗体溶液不变的状态下进行活化。另外，在专利文献1的实施例2中记载，在使抗CD3抗体固相化在培养袋内面后，清洗培养袋内而除去游离抗体，其后封入淋巴细胞和培养液而进行活化。此后，其结果是显示，在保持封入抗体溶液不变的状态下进行活化的实施例1与清洗培养袋内而除去游离抗体的实施例2相比，淋巴细胞的增殖效率低。