[发明专利]伤口愈合的方法

说明书

本发明涉及当被转化进入乳酸细菌细胞时能够表达靶向免疫细胞的蛋白质的质粒，其中所述蛋白质选自由鼠和人CXCL12 1α；CXCL17和Ym1组成的组。本发明还涉及利用所述质粒转化的乳酸细菌，以及所述乳酸细菌用于人和动物伤口愈合的用途。

技术领域

本发明一般涉及重组质粒，特别涉及当被转化进入乳酸细菌细胞时能够表达靶向免疫细胞的重组蛋白质的质粒，其中所述蛋白质选自由鼠和人CXCL12 1α、CXCL17和YM1组成的组。本发明还涉及用所述质粒转化的乳酸细菌，以及所述乳酸细菌用于人和动物伤口愈合的用途。

背景技术

伤口愈合的过程具有重叠的阶段(凝血期、炎症期和增殖/重塑期)，其中局部微环境的组成随着时间的推移而变化，不同的细胞类型发挥不同的作用。愈合过程中的关键细胞参与者是血小板、角质形成细胞/上皮细胞、成纤维细胞/肌成纤维细胞、不同的免疫细胞和内皮细胞。机体中的所有组织都可能受伤，并且愈合过程对器官有一定的特异性，但受损细胞引起的初始信号是相似的。最受关注的伤口愈合形式是在皮肤上。

组织损伤破坏体内平衡，引发凝血过程并激活交感神经系统。形成血块的血小板释放信号，主要是PDGF(血小板衍生生长因子)和TGF(转化生长因子)改变局部环境(参考文献1)。受伤的和应激细胞释放引发免疫细胞如嗜中性粒细胞和单核细胞募集的报警信号。在伤口组织内，免疫细胞分泌各种趋化因子、生长因子如VEGF-A、FGF和EGF(血管内皮生长因子A、成纤维细胞生长因子、表皮生长因子)，ROS(活性氧类)和基质消化酶，其改变微环境并允许愈合过程进入巨噬细胞去除坏死组织和死组织的增生期。来自伤口边缘的细胞，如成纤维细胞和角质形成细胞向内移动到伤口中心，并用一层胶原和细胞外基质覆盖伤口表面。然后使伤口内的成纤维细胞转化为表达收缩性α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)的肌成纤维细胞，使伤口收缩并最终闭合。从成纤维细胞向肌成纤维细胞的转变取决于来自微环境的信号，其中一些来源于免疫细胞，主要是巨噬细胞。在此过程中，血管生长成新形成的组织、肉芽组织。在这个阶段，除了免疫细胞募集和迁移到病变部位之外，通常还会增加流向相邻区域的血流量以增加氧气和营养物的可用性。

伤口闭合后，病变部位由角质形成细胞/上皮细胞重新上皮化，从而恢复器官屏障的完整性。即使在伤口闭合后，也会发生一些组织重塑以使基质结构正常化，并且大多数涉及的免疫细胞死亡或离开该部位。此外，在这个阶段，死亡或垂死的细胞被剩余的组织巨噬细胞摄取并清除(吞噬)(参考文献1)。更快的伤口愈合减轻患者的并发症和不适。

受伤或延迟的皮肤或粘膜伤口愈合是导致疼痛、直接暴露于病原体、丧失组织功能和丧失温度和流体平衡调节的全球临床问题。有几种情况，其中严格控制的伤口愈合过程受损，并且皮肤或粘膜伤口比正常情况下更长时间保持不愈合，在最坏的情况下变成慢性的。

减少血液流向皮肤，特别是在四肢，显著降低愈合过程的效率。皮肤灌注减少或脉管系统功能受损的几种临床情况如PAD(外周动脉疾病)、间歇性跛行、静脉功能不全或动脉硬化斑块的血管阻塞。受损的流向伤口区域的血流量导致氧气和营养物质不足，辅助组织重建的细胞死于坏死或无法在位点处执行任务。此外，如果无法被充分供应，周围的组织将失去功能并最终开始死亡。组织在重塑阶段代谢非常活跃，并且氧耗高。

妨碍皮肤伤口愈合的另一个因素是高血糖症和糖尿病。在高血糖条件下，细胞信号传导和免疫系统功能受损。糖尿病导致的并发症包括微血管变化和周围神经元的损伤。因此，糖尿病患者经常在脚上发展出慢性创伤，通常称为糖尿病足。今天针对这些患者的可用治疗方法是采用手术清创或胶原酶来去除死亡组织并配合全身抗生素治疗和闭合伤口敷料。在一些实验研究中，生长因子和生物材料已被应用于慢性伤口(参考文献2)。

基质细胞衍生因子1(SDF-1)，也被称为C-X-C基序趋化因子12(CXCL12)，其是在机体中由CXCL12基因编码的趋化因子蛋白。WO2009/079451公开了一种用于促进受试者中伤口愈合的方法，其包括直接对伤口或接近伤口的区域施用有效地促进受试者伤口愈合的量的SDF-1。