[发明专利]用于在传感器表面上检测分析物-配体结合的方法

说明书

本发明提供针对第一分析物的存在而测定样品溶液的方法，该方法包括：（a）提供传感器表面，该传感器表面具有固定化于该传感器表面的配体；（b）使样品溶液流过传感器表面；以及（c）在传感器表面上检测分析物与配体的结合的存在与否；其中，样品溶液与固定化的配体之间的接触时间不到15秒钟。

发明领域

本发明涉及在传感器表面处确定分子结合相互作用的方法，且更具体地，涉及使用生物传感器来确定分析物与配体之间的相互作用的方法。

发明背景

能够实时地对分子（诸如，生物分子）之间的相互作用进行监测的分析传感器系统越来越受到关注。这些系统通常基于光学生物传感器，并且，一般被称为相互作用分析传感器或生物特异相互作用分析传感器。具有代表性的这样的生物传感器系统为GEHealthcare所销售的BIACORE®仪表，该仪表使用表面等离子体共振（SPR），用于检测样品中的分子和固定化于传感表面上的分子结构之间的相互作用。随着样品经过传感器表面，结合的进程直接地反映出发生相互作用的速率。样品的注入随后是缓冲液流动，在此期间，检测器响应反映出表面上的复合物的离解的速率。来自BIACORE®系统的典型输出是描述随着时间推移而变化的分子相互作用的进程（包括缔合相部分和离解相部分）的图表或曲线。一般显示于计算机屏幕上的该结合曲线通常被称为“传感图”。

在BIACORE®系统（及类似的传感器系统）的情况下，因而，有可能在不使用标记的情况下，且通常无需纯化所涉及的物质的情况下，不仅实时地检测样品中的特定分子（分析物）的存在和浓度，而且还实时地检测另外的相互作用参数（包括分子相互作用中的结合（缔合）和离解的动力速率常数以及表面相互作用的亲和力）。通过使许多不同的样品分析物浓度的所得动力学数据与表现为微分方程的形式的相互作用模型的数学描述拟合，能够获得缔合速率常数（ka）和离解速率常数（kd）。能够根据缔合速率常数和离解速率常数而计算亲和力（表示为亲和常数KA或离解常数KD）。还有可能通过平衡结合分析而测量亲和力值，平衡结合分析涉及针对一系列的分析物浓度测定平衡或稳态下的结合的水平，假定在结合相互作用的缔合相结束时或临近结束时已达到该水平。

在当前的方法中，方法学力图获得可高度重复且高质量的响应信号。这通过例如以下的几个耗时的措施而实现：长的注入或接触时间（超过30秒钟），从而具有高而稳定的响应值；对流控系统进行冲洗，从而避免干扰；携带(carry-over)控制注入，从而对来自流控装置的污染的响应贡献进行监测；以及再生，从而在每一个循环中，使传感器表面达到同一起始条件。这些步骤可能非常耗时，并且，得到的循环时间可能通常达到600秒钟或更久。这样的长循环时间可能导致相当长的运行时间，特别是当需要在单个实验中评估多个分析物样品的情况下如此。

本发明至少部分地旨在克服与使用生物传感器来评估分析物与配体之间的相互作用的当前的方法相关联的问题。

发明概要

根据本发明的第一方面，提供针对第一分析物的存在而测定样品溶液的方法，该方法包括：

（a）提供传感器表面，该传感器表面具有固定化于该传感器表面的配体；

（b）使样品溶液流过传感器表面；以及

（c）在传感器表面上检测分析物与配体的结合的存在与否；

其中，样品溶液与固定化的配体之间的接触时间不到15秒钟。