[发明专利]固定化细胞及其制备方法

权利要求书

1.一种固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法，其包括如下步骤：

a)将聚乙烯醇或者聚乙烯醇与聚乙二醇的混合物或者聚乙烯醇与海藻酸钠的混合物于水性溶液中充分溶解，其中所述聚乙烯醇的添加量为1～13wt％，

b)向得到的溶液中加入待固定化的含有赖氨酸脱羧酶的细胞并使之固定化，和

c)在溶液凝胶化后用环氧氯丙烷酒精溶液处理所述溶液，

其中，所述环氧氯丙烷的浓度为1～5.5wt％并且固定化的条件以不破坏含有赖氨酸脱羧酶的细胞的活力为限，并且其中海藻酸钠的添加量为0.1-3wt％，聚乙二醇的添加量为0.1-5wt％。

2.根据权利要求1所述的固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法，其中步骤b)中的固定化采用化学固定化，且化学固定化为氯化钙和硼酸交联固定化。

3.根据权利要求2所述的固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法，其中氯化钙溶液浓度为0.2-5wt％，硼酸溶液浓度为1-10wt％。

4.根据权利要求1至3任一项所述的固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法，其中在溶液凝胶化后用环氧氯丙烷酒精溶液处理所述溶液的步骤通过按照PVA中羟基理论摩尔数的1～1.5倍投入环氧氯丙烷酒精溶液振荡反应20～60min，分离出颗粒并洗涤后得到成品而进行。

5.根据权利要求1至3任一项所述的固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法，其中含有赖氨酸脱羧酶的细胞来源于植物、微生物、昆虫或动物。

6.根据权利要求5所述的固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法，其中微生物选自嗜碱芽孢杆菌(Bacillus halodurans)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、天蓝色链霉菌(Streptomyces coelicolor)、毛链霉菌(Streptomyces pilosus)、啮蚀艾肯氏菌(Eikenella corrodens)、嗜氨基酸真杆菌(Eubacterium acidaminophilum)、鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、蜂房哈夫尼菌(Hafnia alvei)、嗜酸热原体(Thermoplasma acidophilum)、深海热球菌(Pyrococcusabyssi)或谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。

7.根据权利要求5所述的固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法，其中微生物选自大肠杆菌或蜂房哈夫尼菌。

8.一种利用权利要求1-7任一项所述的固定化含有赖氨酸脱羧酶的细胞的方法获得的固定化的含有赖氨酸脱羧酶的细胞。

9.一种1,5-戊二胺的制备方法，其包括将权利要求8所述的固定化的含有赖氨酸脱羧酶的细胞与含有赖氨酸的液体接触以及获得1,5-戊二胺的步骤；其中与固定化的含有赖氨酸脱羧酶的细胞接触的含有赖氨酸的液体的pH值为4.0～9.0；其中固定化的含有赖氨酸脱羧酶的细胞与含有赖氨酸的液体接触的温度为25～55℃。

10.根据权利要求9所述的1,5-戊二胺的制备方法，其中含有赖氨酸的液体为赖氨酸发酵液，赖氨酸发酵液的浓缩液或稀释液，赖氨酸发酵液去除菌体后的除菌赖氨酸发酵液和除菌赖氨酸发酵液的浓缩液或稀释液，以及配制的赖氨酸溶液。

11.根据权利要求9所述的1,5-戊二胺的制备方法，其中含有赖氨酸的液体为赖氨酸发酵液。

12.根据权利要求10或11所述的1,5-戊二胺的制备方法，其中赖氨酸发酵液通过微生物发酵制备获得。

13.根据权利要求12所述的1,5-戊二胺的制备方法，其中制备赖氨酸发酵液的微生物选自棒状杆菌属、埃希氏杆菌属。