[发明专利]培养哺乳动物细胞的方法

权利要求书

1.一种培养哺乳动物细胞的方法，所述方法包括：

在足够产生重组蛋白的条件下灌注培养哺乳动物细胞，其包含编码所述重组蛋白的核酸，其中

灌注培养包括在包含浓度为1.8g/L或浓度高于1.8g/L的泊洛沙姆-188的液体培养基中培养，且其中所述泊洛沙姆-188在培养步骤前存在于所述培养基中和/或添加至所述培养基和/或在培养步骤过程中添加至所述培养基。

2.权利要求1的方法，其中所述培养基包含浓度为1.8g/L或浓度高于1.8g/L的泊洛沙姆-188。

3.权利要求2的方法，其中所述培养基包含浓度为2.8g/L或浓度高于2.8g/L的泊洛沙姆-188。

4.权利要求3的方法，其中所述培养基包含浓度为4.0g/L或浓度高于4.0g/L的泊洛沙姆-188。

5.权利要求4的方法，其中所述培养基包含浓度为6.0g/L或浓度高于6.0g/L的泊洛沙姆-188。

6.权利要求5的方法，其中所述培养基包含浓度为8.0g/L或浓度高于8.0g/L的泊洛沙姆-188。

7.权利要求6的方法，其中所述培养基包含浓度为10.0g/L或浓度高于10.0g/L的泊洛沙姆-188。

8.权利要求1-7中任一项的方法，其中所述培养基还包含消泡剂，且所述培养基中消泡剂(g/L)与泊洛沙姆-188(g/L)的比例为所述液体培养基中约0.5％至约6.0％。

9.权利要求8的方法，其中所述培养基中消泡剂(g/L)与泊洛沙姆-188(g/L)的比例为约1.0％至约5.5％。

10.权利要求9的方法，其中所述培养基中消泡剂(g/L)与泊洛沙姆-188(g/L)的比例为约1.5％至约5.0％。

11.权利要求1的方法，其中所述方法包括在培养步骤前将泊洛沙姆-188添加至所述培养基和/或在培养步骤过程中将泊洛沙姆-188添加至所述培养基以在所述培养基中提供浓度为1.8g/L或浓度高于1.8g/L的泊洛沙姆-188。

12.权利要求1或11的方法，其中泊洛沙姆-188存在于所述培养基。

13.权利要求11或12的方法，其中所述方法包括在培养步骤前将泊洛沙姆-188添加至所述培养基和/或在培养步骤过程中将泊洛沙姆-188添加至所述培养基以在所述培养基中提供浓度为2.8g/L或浓度高于2.8g/L的泊洛沙姆-188。

14.权利要求13的方法，其中所述方法包括在培养步骤前将泊洛沙姆-188添加至所述培养基和/或在培养步骤过程中将泊洛沙姆-188添加至所述培养基以在所述培养基中提供浓度为4.0g/L或浓度高于4.0g/L的泊洛沙姆-188。

15.权利要求14的方法，其中所述方法包括在培养步骤前将泊洛沙姆-188添加至所述培养基和/或在培养步骤过程中将泊洛沙姆-188添加至所述培养基以在所述培养基中提供浓度为6.0g/L或浓度高于6.0g/L的泊洛沙姆-188。

16.权利要求15的方法，其中所述方法包括在培养步骤前将泊洛沙姆-188添加至所述培养基和/或在培养步骤过程中将泊洛沙姆-188添加至所述培养基以在所述培养基中提供浓度为8.0g/L或浓度为8.0g/L的泊洛沙姆-188。

17.权利要求16的方法，其中所述方法包括在培养步骤前将泊洛沙姆-188添加至所述培养基和/或在培养步骤过程中将泊洛沙姆-188添加至所述培养基以在所述培养基中提供浓度为10.0g/L或浓度高于10.0g/L的泊洛沙姆-188。

18.权利要求1-17中任一项的方法，其中所述方法包括将所述培养基中的泊洛沙姆-188浓度随时间增加。

19.权利要求18的方法，其中所述培养基中的泊洛沙姆-188浓度随时间增加基于培养基中的活细胞密度。

20.权利要求19的方法，其中所述方法包括当所述培养基中的活细胞密度为约35x10⁶细胞/mL至约60x10⁶细胞/mL时，将培养基中的泊洛沙姆-188浓度增加到大于1.8g/L。