[发明专利]培养细胞的方法

说明书

描述了培养自体细胞的方法以及治疗哺乳动物患者的方法。细胞培养在基质材料上，该基质材料具有用脂肪酸酯处理的表面以便具有强疏水表面，并且从患者的血液样品中获得的自体血浆用作生长培养基来培养细胞。基质材料也用作用于将培养的细胞转移至患者的转移敷料，以及用作伤口覆盖敷料。本发明还描述了使用该培养方法来培养自体细胞的试剂盒以及系统。

技术领域

本发明涉及培养细胞的方法，且特别涉及培养用于制备培养的上皮自体移植物(epithelial autograft)(CEA)的自体细胞的方法，以及通过移植由本发明方法培养的自体细胞来治疗哺乳动物患者的方法，且特别用于治疗烧伤受害者。

背景技术

第一种培养的上皮自体移植物(CEA)由Rheinwald和Green实现(Serialcultivation of strains of human epidermal keratinocytes:the formation ofkeratinizing colonies from single cells,Cell.1975,6:331-344)。自此来自培养的细胞的皮肤移植物被频繁地使用于治疗皮肤缺陷，诸如烧伤。

然而，还存在一些没有完全解决的相关缺点，诸如例如，易碎的表皮片和在将移植物从培养环境转移到患者期间可能持续的结构损伤、“移植物成活率(graft take)”差和微生物污染等。

市售的培养的上皮自体移植物(CEA)产品诸如EPICEL已充分用于治疗严重的烧伤受害者。市售产品潜在的问题是它们使用的动物产品可能并不总是与人类患者能免疫相容。如EPICEL的产品已经克服了那些相容性问题中的一些，但以巨大的代价使得该产品过于昂贵，特别是在像非洲和其他第三世界国家的地区，在那里患者难以负担基本的保健治疗。

在市售产品不易获得的地方，可能需要在当地培养皮肤。考虑到在运输此类移植细胞期间无菌性和结构完整性的实际担忧，合适的实验室与医院的距离使得这并不总是可行的选择。

Barlow(美国专利No 6,039,972)描述了一种适形的伤口敷料，其通过生产锚定于合成聚合物膜表面的培养的上皮细胞的亚汇合层来制备，该合成聚合物膜是疏水的、对细胞生长无抑制性并且无细胞毒性。该膜需要在细胞培养之前或之后通过穿孔形成的孔。细胞的生长发生在通常使用的含有胎牛血清的生长培养基中。

Rennekampf等人(Wound closure with human keratinocytes cultured on apolyurethane dressing overlaid on a cultured human dermal replacement,Surgery,1996,120:16-22)描述了在聚氨酯片上将人角质细胞(HK)片培养成单层，其是合成的亲水敷料。HK是从人类尸体供体皮肤获得的，且只有61％的受试动物实现了阳性移植物成活率。

Van Dorp等人(A modified culture system for epidermal cells forgrafting purposes:an in vitro and in vivo study,Wound Repair Regen.1999,7(4):214-225)在聚酯填料基质上培养了人类和猪的表皮角质细胞。然而，他们发现，成功的上皮再生只在细胞片通过使用分散酶(Dispase)酶处理而随之从基质脱附时才可能。已知使用分散酶酶促脱附能损坏可用于伤口愈合过程的某些细胞。