[发明专利]一种香菇中L‑噻唑烷‑4‑羧酸的快速检测方法

权利要求书

1.一种香菇中L-噻唑烷-4-羧酸的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）配制标准溶液：配制2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL系列质量浓度的L-噻唑烷-4-羧酸标准溶液，测定L-噻唑烷-4-羧酸标准品在2～100 μg/mL范围内的浓度和峰面积的线性关系；

（2）香菇样品的预处理：准确称取2.0 g研磨后的香菇样品于50 mL离心管中，加入20 mL甲醇水溶液摇匀，100 W功率下超声提取20 min；再在10000 r/min转速下，离心10 min；离心后，取10 mL上清液到50 mL离心管，加入10 mL乙腈饱和的正己烷，涡旋混匀1 min，除去脂类物质，取5 mL下层提取液加入到试管中，再加5 mL 2wt%氨水摇匀作为上样液；

（3）固相萃取：采用WondaSep MAX固相萃取小柱，先分别用3 mL甲醇和3 mL去离子水将小柱活化，再加入步骤（2）提取的上样液过柱后，分别用3 mL 5wt%氨水和5 mL甲醇淋洗小柱，小柱空干后，用4 mL甲醇-1.0 wt%甲酸水溶液的混合液作为洗脱液，洗脱目标物，最后，氮吹仪设置温度40℃将洗脱液吹干，加入1 mL乙腈-0.1wt%磷酸溶液定容，涡旋混匀后过0.22 μm有机滤膜，供HPLC测定；

（4）液相色谱测定：操作系统为岛津LC-solution工作站；色谱柱：岛津Inertsil HILIC液相色谱柱，其规格为4.6×250 mm，5 μm；流动相：有机相为乙腈，无机相为0.1wt%磷酸水溶液，体积比为85:15，等度洗脱；流速：0.8 mL/min；柱温：30℃；进样体积：5 μL；检测波长：193 nm；以上参数选定后，分别对提取的样品进行分离测定。

2.根据权利要求1所述的香菇中L-噻唑烷-4-羧酸的快速检测方法，其特征在于：步骤（2）中所述甲醇水溶液中甲醇和水的体积比为70:30。

3.根据权利要求1所述的香菇中L-噻唑烷-4-羧酸的快速检测方法，其特征在于：步骤（3）所述WondaSep MAX固相萃取小柱为阴离子固相萃取小柱，其规格为60 mg/3 mL；步骤（3）所述甲醇-1.0 wt%甲酸水溶液的混合液中，甲醇、1.0 wt%甲酸水溶液的体积比为90:10。

4.根据权利要求1所述的香菇中L-噻唑烷-4-羧酸的快速检测方法，其特征在于：步骤（3）所述乙腈-0.1wt%磷酸溶液中，乙腈、0.1wt%磷酸溶液的体积比为85:15。

5.根据权利要求1所述的香菇中L-噻唑烷-4-羧酸的快速检测方法，其特征在于：步骤（1）所得线性关系为：线性回归方程为Y=5146.42X-1171.96，相关系数为0.9998。