[发明专利]鸟-胞分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物与探针

权利要求书

1.一种鸟-胞分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，以鸟-胞分枝杆菌16SrRNA的特异性区域作为检测靶标，包含有一对用于在M-MLV反转录酶作用下产生鸟-胞分枝杆菌靶标核酸RNA的DNA拷贝的检测引物T7和nT7，一条用于与在T7 RNA聚合酶作用下根据所述鸟分枝杆菌靶标核酸RNA的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的鸟分枝杆菌检测探针和一条用于与在T7 RNA聚合酶作用下根据所述胞内分枝杆菌靶标核酸RNA的DNA拷贝产生的RNA拷贝特异结合的胞内分枝杆菌检测探针；

其中所述鸟分枝杆菌16S rRNA的特异性区域的核苷酸序列如序列表中序列1所示；所述胞内分枝杆菌16S rRNA的特异性区域的核苷酸序列如序列表中序列2所示；所述鸟-胞分枝杆菌检测引物由T7引物和nT7引物组成，T7引物的核苷酸序列如序列表中序列3所示，nT7引物的核苷酸序列如序列表中序列4所示；所述鸟分枝杆菌检测探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，所述胞内分枝杆菌检测探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，所述探针的5’端标记FAM荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团；

所述试剂盒还包含鸟-胞分枝杆菌内标和内标检测探针；所述内标为鸟-胞分枝杆菌靶标核苷酸序列的竞争性内标，其核苷酸序列如序列表中序列7所示，可与内标检测探针特异性结合；所述内标检测探针的核苷酸序列如序列表中序列8所示。

2.根据权利要求1所述的鸟-胞分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包含M-MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶，所述M-MLV反转录酶和T7 RNA聚合酶存在于SAT酶液中，所述T7引物、nT7引物、鸟分枝杆菌检测探针、胞内分枝杆菌检测探针和内标检测探针存在于鸟-胞分枝杆菌扩增检测液中。

3.根据权利要求1所述的鸟-胞分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述内标检测探针的5’端标记HEX荧光基团，3’端标记DABCYL淬灭基团，内标检测探针存在于鸟-胞分枝杆菌扩增检测液中。

4.根据权利要求1-3任一所述的鸟-胞分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包含样本保存液、鸟-胞分枝杆菌扩增检测液、SAT酶液、MAC阳性对照、MAC阴性对照、MAC内标，其中：

（1）样本保存液：含硫酸铵(NH₄)₂SO₄和HEPES的水溶液；

（2）鸟-胞分枝杆菌扩增检测液：含dNTPs、NTPs、以及所述的T7引物、nT7引物、鸟分枝杆菌检测探针、胞内分枝杆菌检测探针和内标检测探针；

（3）SAT酶液：含M-MLV反转录酶、T7 RNA聚合酶；

（4）MAC阳性对照；含灭活的鸟-胞分枝杆菌的稀释物；

（5）MAC阴性对照：不含有任何核酸的溶液；

（6）MAC内标：含所述的鸟-胞分枝杆菌内标的稀释物。

5.根据权利要求4所述的鸟-胞分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒的各种试剂组成如下：

（1）样本保存液：含5～50 mM (NH₄)₂SO₄和25～250 mM HEPES的水溶液；

（2）鸟-胞分枝杆菌扩增检测液：含dNTPs 0.1～10 mM、NTPs 1～20 mM、T7引物、nT7引物、鸟分枝杆菌检测探针、胞内分枝杆菌检测探针、内标检测探针的水溶液，其中所述T7引物、nT7引物、鸟分枝杆菌检测探针、胞内分枝杆菌检测探针、内标检测探针的浓度均为250/3～1000/3 pmol/mL；

（3）SAT酶液：含M-MLV反转录酶 40000～400000 U/mL、T7 RNA聚合酶20000～200000U/mL；

（4）MAC阳性对照；含灭活的鸟-胞分枝杆菌的稀释物；

（5）MAC阴性对照：不含有任何核酸的溶液；

（6）MAC内标：含所述的鸟-胞分枝杆菌内标的稀释物。