[发明专利]高效液相色谱串联二级质谱技术检测尿液中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生化检测领域，具体涉及一种高效液相色谱串联二级质谱技术检测尿液 中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的试剂盒。

背景技术

DNA和RNA氧化损伤应激产物作为生物标记物的潜在用途和价值是生物医学研究 的一个重要方面。8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷作为两种重要的氧化标记物，在组织细 胞内产生，经血液运输，由肾脏随尿液排出体外。由于两种物质在体内较为稳定，且尿 液样本易得，可以实现无创检测，通过对尿液中两种物质的监测可以为有效评价机体各 种因素引起的氧化损伤提供帮助。此外，通过对健康人体内两种生物标记物的含量检测， 可以评估性别、年龄和吸烟等潜在因子的影响作用。因此，开发一种经济、高效的8- 羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷检测方法至关重要。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种高效液相色谱串联二级质谱技术检测尿液中 8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的试剂盒，以解决现有技术存在的特异性较差和灵敏度低 的问题。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

高效液相色谱串联二级质谱技术检测尿液中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的试剂 盒，它包括如下试剂：

(1)洗脱液：

洗脱液A：0.1％v/v甲酸水溶液；

洗脱液B：乙腈；

(2)标准品溶液：含8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的空白人工尿液基质溶液；

(3)内标物工作液：含[¹³C，¹⁵N₂]-8-羟基脱氧鸟苷的甲醇溶液；

(4)稀释液：

稀释液1：空白人工尿液基质；

稀释液2：甲醇；

(5)有机溶剂：甲醇；

(6)质控品：含有8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的空白人工尿液基质溶液，分高 中低三个浓度，分别为QC(H)、QC(M)、QC(L)；

其中，QC(H)、QC(M)、QC(L)中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷质控品对应浓度见 表1；

表18-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷质控品对应浓度(单位ng/mL)

其中，所述的标准品溶液包括混合标准液C2和混合标准液C3；其中，所述的混合 标准液C2为含浓度为96ng/mL的8-羟基脱氧鸟苷和浓度为97ng/mL的8-羟基鸟苷的空 白人工尿液基质溶液，所述的混合标准液C3为含浓度为9.6ng/mL的8-羟基脱氧鸟苷和 浓度为9.7ng/mL的8-羟基鸟苷的空白人工尿液基质溶液。

其中，所述的内标物工作液为含浓度为0.991μg/mL的[¹³C，¹⁵N₂]-8-羟基脱氧鸟苷 的甲醇溶液。

其中，所述的空白人工尿液基质为含0.5586g/L二水合氯化钙、0.6099g/L六水合氯 化镁、4.2077g/L氯化钠、2.0596g/L硫酸钠、0.6470g/L柠檬酸钠二水合物、0.0201g/L 草酸钠、2.5449g/L磷酸二氢钾、1.4388g/L氯化钾、0.9200g/L氯化铵、2.4985g/L尿素 和1.0520g/L肌酐的水溶液。

其中，所述的尿液为人或动物的尿液。

上述高效液相色谱串联二级质谱技术检测尿液中8-羟基脱氧鸟苷和8-羟基鸟苷的 试剂盒的制备方法，

(1)洗脱液：

洗脱液A：配制0.1％v/v甲酸水溶液；

洗脱液B：乙腈；

(2)标准品溶液：