[发明专利]一种简单快速接种中国小麦花叶病毒的方法及其应用

权利要求书

1.一种简单快速接种中国小麦花叶病毒的方法，包括以下步骤：

1)引物设计：通过本实验室测定的中国小麦花叶病毒基因组片段RNA1和RNA2序列共设计4条引物，其中引物对R1f/R1r用于扩增RNA1,引物对R2f/R2r用于扩增RNA2；

2)病毒基因组扩增反应：以病毒基因组cDNA作模板，采用高保真的PhusionDNA聚合酶进行扩增，其中引物对R1f/R1r扩增的RNA1产物长约7.2-kb，引物对R2f/R2r扩增的RNA2产物长约3.6-kb；

3)病毒基因组克隆：病毒全长基因组RNA1、RNA2扩增产物经切胶纯化后，采用In-Fusion克隆试剂盒参照商家说明书分别连接至线性化的双元载体质粒上，测序验证获得分别含RNA1和RNA2全长cDNA片段的重组双元载体质粒，然后利用电转化仪将含RNA1和RNA2全长cDNA片段的重组质粒分别导入农杆菌；

4)人工接种：将含有中国小麦花叶病毒基因组的农杆菌等量混合，然后通过注射器将农杆菌混合液浸润入植物体内，2周后进行病毒分子检测并观测植株表型变化。

2.根据权利要求1所述的简单快速接种中国小麦花叶病毒的方法的应用，包括以下步骤：经人工接种中国小麦花叶病毒的植株，分别置于12、15、17、20、25℃条件下继续培养，二周后进行病毒分子检测并分析病毒在不同温度下的复制等特性。