[发明专利]高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的方法及培养基

权利要求书

1.高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的培养基，其特征在于，所述培养基包括MSB基本培养基，2-(N-吗啡啉)乙磺酸0.5～1.5g/L，蔗糖20～30g/L，谷氨酰胺40～60mg/L，天冬酰胺40～60mg/L，6-苄氨基嘌呤0.5～2mg/L，琼脂6～8g/L，pH值为5.6～5.8。

2.根据权利要求1所述的培养基，其特征在于，所述培养基包括MSB基本培养基，2-(N-吗啡啉)乙磺酸1g/L，蔗糖25g/L，谷氨酰胺50mg/L，天冬酰胺50mg/L，6-苄氨基嘌呤1mg/L，琼脂6.5g/L，pH值为5.8。

3.高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)按照权利要求1或2任一所述的配方配制 培养基；

2)大豆种子消毒灭菌及萌发，将大豆种子先用乙醇消毒5-10分钟，再用过氧化氢消毒15-30分钟，最后用灭菌水清洗3-5遍，之后再在大豆种子中加入灭菌水，放入4℃下静置培养至长出5-8mm胚轴；

3)大豆子叶节外植体的制备，将步骤2)中长出5-8mm胚轴的大豆种子剥去种皮，切去部分胚轴，留下带有3-5mm上胚轴的大豆种子，沿胚轴中线纵向切开上胚轴，得到带有3-5mm上胚轴和顶端分生组织的大豆子叶节，即得到大豆子叶节外植体；

4)丛生芽的诱导，将步骤3)中制备的大豆子叶节外植体接入步骤1)制备的所述培养基中，置于温室中培养，培养温度为24-26℃，湿度为50-70％，光照强度为1500-2000lux，光照时间为16h，7-10天后得到具有2-5株丛生芽的子叶节外植体；

5)大量丛生芽的诱导，将步骤4)中获得的长有2-5株丛生芽的子叶节外植体取出，切除大丛生芽，继续将其置于步骤1)中配置的所述培养基上并于温室中培养，培养温度为24-26℃，湿度为50-70％，光照强度为1500-2000lux，光照时间为16h，培养10-15天后获得具有20-40株丛生芽的子叶节外植体。

4.根据权利要求3所述的高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的方法，其特征在于，步骤2)中乙醇的体积分数为70-80％。

5.根据权利要求3所述的高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的方法，其特征在于，步骤2)中过氧化氢的体积分数为15-20％，并且用过氧化氢给种子消毒时，将种子置于25-28℃振荡培养箱中黑暗振荡，转速为100-200r/min。

6.根据权利要求3所述的高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的方法，其特征在于，步骤2)中将大豆种子消毒灭菌后，再加入的灭菌水的量为刚没过大豆种子即可，将加有灭菌水的大豆种子培养14-18h，长出5-8mm胚轴。

7.根据权利要求3所述的高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的方法，其特征在于，步骤4)中将所述大豆子叶节外植体插入所述培养基中的方式为斜插，子叶叶面朝上。

8.根据权利要求3所述的高效诱导大豆子叶节外植体产生丛生芽的方法，其特征在于，步骤5)中切除的大丛生芽长度为2-4cm。