[发明专利]转基因玉米事件GT1外源插入片段旁侧序列及其应用

说明书

本发明涉及一种转基因玉米事件GT1外源插入片段旁侧序列及其应用。本发明提供的富含α‑生育酚的转基因玉米事件GT1经鉴定有一个插入位点，这个插入位点的外源插入片段的3’端旁侧序列如序列1所示。本发明提供了用于检测该旁侧序列的引物。本发明的转基因玉米事件GT1外源插入片段旁侧序列的鉴定适用于对富含α‑生育酚的转基因玉米GT1(包括亲本、杂种F1和后代)及其制品(包括植株、组织、种子及其制品)的检测。

技术领域

本发明涉及植物基因工程领域，更具体的说，涉及一种转基因玉米事件GT1外源插入片段旁侧序列以及用于检测该序列的PCR引物，本发明还涉及利用该引物进行转基因玉米检测的方法和试剂盒。

背景技术

维生素E是一类人体所必需的脂溶性维生素，具有重要的生理功能。它能够清除脂质过氧化所产生的自由基而稳定保护生物膜的脂双层，使细胞免受过氧化物的伤害。因而被作为一种有效的抗氧化剂广泛地应用在医药、食品、饲料等行业中。大量动物实验证明，在每公斤饲料中添加40-100IU(国际单位)的维生素E，具有提高动物免疫力，改善肉质，提高动物的繁殖性能，缓解其应激反应等显著效果。另外，在饲料中添加维生素E能增加肉品的稳定性，防止肉类腐败、变味、变色，并延长上架时间。近20年来的临床研究表明，维生素E对于人体健康更具有重要作用。每天吸收100－1000IU的维生素E则可提高机体免疫力，延缓人体衰老，降低或防治心血管疾病和癌症的发生。

天然维生素E由8种生育酚异构体组成。根据侧链饱和度可分为生育酚(tocopherol)和三烯生育酚(tocotrienol)两大类。每类依芳香环上甲基数目和位置的不同又分别分为α、β、γ、δ生育酚和α、β、γ、δ三烯生育酚。这8种同系物在植物中的含量及相对活性均不尽相同，α-生育酚的生物活性最高(α、β、γ、δ相对活性分别为100％、50％、10％和3％，α-三烯生育酚约为30％，其他三烯生育酚为10％左右。国际上对于维生素E产品的质量标准也主要以α-生育酚的含量和活性来判定。但是α-生育酚在植物种子中的含量很低，即使在用于提取维生素E的各油料作物种子中的含量也很低，仅为7％-20％，而其生物合成前体γ-生育酚的含量可占总生育酚含量的50-70％。因此大幅度提高植物特别是油料作物中高活性α-生育酚的含量，改变其所占比例将会为改良作物品质、提高其农业附加值带来启示，具有良好的社会和经济效益。

研究植物维生素E合成途径发现，通过甲基转移作用将其前体γ-生育酚转化为α-生育酚的γ-生育酚甲基转移酶(γ-TMT)可提高α-生育酚的含量和比例，可使植物中的α-生育酚的含量由原来的10％提高到90％以上，由此可使植物中维生素E的生理活性大大提高。

发明内容

本申请的目的在于把GmTMT基因通过基因枪方法转化到玉米中，获得了一个富含α-生育酚的转基因玉米株系，并确定了其旁侧序列及特异性检测方法。

本发明另一目的在于提供一种转基因玉米的PCR检测方法和试剂盒。

1、将GmTMT基因构建到pGA1611载体，获得了pGA1611-GmTMT表达载体，启动子为Ubi，终止子为Nos。

2、利用基因枪将GmTMT表达框和筛选基因表达框Bar(来自pCAMBIA3301载体)共转化玉米，获得转基因玉米。

3、转基因玉米中α-生育酚含量显著提高。

4、获得了GmTMT表达框在转基因玉米插入位点的3’旁侧序列。