[发明专利]一种黄酮类化合物TA31a及其制备方法与用途

权利要求书

1.黄酮类化合物，命名为6,8,4＇-三羟基黄酮-7-C-吡喃葡萄糖基-4＇-O-(4″＇-吡喃葡萄糖基)吡喃葡萄糖苷，其分子式为C₃₃H₄₀O₂₀，其结构式如式1：

2.权利要求1所述的黄酮类化合物在用于制备具有抗氧化活性、抗肿瘤活性、免疫增强活性或PC12细胞保护作用中任意一项所述活性的药物或保健食品中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：满足以下任意一项：

所述具有抗氧化活性是指具有清除DPPH自由基的能力；

所述具有抗氧化活性是指清除羟自由基的能力；

所述具有抗氧化活性是指具有清除ABTS自由基的能力；

所述具有抗氧化活性是指具有还原能力。

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述抗肿瘤活性是指对于HGC-27肿瘤细胞增殖的抑制作用。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：满足以下任意一项：

所述具有免疫增强活性是指能够促进巨噬细胞产生NO；

所述具有免疫增强活性是指能促进巨噬细胞的吞噬功能；

所述具有免疫增强活性是指对巨噬细胞的增殖有显著影响。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：满足以下任意一项：

所述具有PC12细胞保护作用是指能减轻H₂O₂对PC12细胞的损伤；

所述具有PC12细胞保护作用是指能够降低PC12细胞中由H₂O₂损伤引起的MDA含量升高；

所述具有PC12细胞保护作用是指减少PC12细胞的LDH释放量；

所述具有PC12细胞保护作用是指能提高PC12细胞内SOD的活力；

所述具有PC12细胞保护作用是指能提高PC12细胞内CAT酶的活力；

所述具有PC12细胞保护作用是指能提高PC12细胞内GSH-Px的活力；

所述具有PC12细胞保护作用是指能抑制由H₂O₂损伤引起的细胞内ROS含量升高；

所述具有PC12细胞保护作用是指能够稳定线粒体膜电位。

7.权利要求1所述黄酮类化合物的制备方法，包括以菥蓂子为原料，经步骤A浸膏提取、步骤B有机溶剂萃取、步骤C反相硅胶柱层析、步骤D高效液相色谱分离步骤制备而得，其特征在于：

A、浸膏提取：取菥蓂子，粉碎至20～40目，用90％～100％乙醇回流提取2～5次，每次40～80min，合并提取液、过滤，减压浓缩至浸膏；

B、有机溶剂萃取：A步骤浸膏用蒸馏水混悬，加入等体积石油醚萃取5～8次，收集水相溶液，加入等体积乙酸乙酯萃取5～8次，收集水相溶液，加入等体积正丁醇萃取5～8次，收集正丁醇相溶液，减压浓缩至浸膏；

C、反相硅胶柱层析：B步骤浸膏用乙醇溶解，进行反相硅胶柱层析；用乙醇-水溶液进行梯度洗脱，乙醇-水的起始体积配比为1:9，终止体积配比为6:4，合并相同的部分，收集各部分洗脱液并浓缩；

D、高效液相色谱分离：C步骤洗脱液的1:9部分进一步用高效液相色谱分离纯化，即得所述的黄酮类化合物。

8.根据权利要求7所述的黄酮类化合物的制备方法，其特征在于：满足以下任意一项：

所述步骤A中的乙醇浓度为90％～100％；或

所述步骤B中浸膏用蒸馏水混悬后，分别用石油醚、乙酸乙酯萃取除杂，取萃取后的水相溶液，用正丁醇萃取，收集正丁醇相溶液；或

所述步骤C中用乙醇-水溶液进行梯度洗脱，乙醇-水的起始体积配比为1:9，终止体积配比为6:4，在梯度洗脱过程中，乙醇-水溶液浓度至少为1:9、2:8、3:7、4:6、5:5或6:4的一种；或

所述步骤D中高效液相色谱分离纯化是采用20mm×250mm，5μm的C₁₈色谱柱，流速为5～20ml/min，流动相为30～45％的甲醇，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样190～210μl，收集10.2～15.2min的色谱峰，多次累加后干燥。