[发明专利]通过差分带电荷微粒迁移率进行脂蛋白分析

说明书

本发明提供利用差分带电荷微粒迁移率分析方法，由生物样品制备用于诊断目的的脂蛋白的仪器和方法，该脂蛋白包括HDL、LDL、Lp(a)、IDL和VLDL。还提供通过差分带电荷微粒迁移率分析脂蛋白的大小分布的方法，该脂蛋白通过本发明的方法制备。还提供评估脂质相关的健康风险、心血管状况、心血管疾病的风险和对治疗性介入的反应性的方法，该方法利用通过本发明的方法测定的脂蛋白大小分布。

本分案申请为分案申请201410475329.3的分案申请，原始申请的申请日是2008年6月6日、申请号是200880101850.3(PCT/US2008/066178)、发明名称为“通过差分带电荷微粒迁移率进行脂蛋白分析”。

发明领域

本发明总体涉及利用离子迁移率测量装置和方法进行用于诊断目的的微粒大小分析和包括脂蛋白的生物微粒的分析的领域。本发明还提供用于纯化和分离包括但不限于脂蛋白和含有脂蛋白的生物复合物的生物分子的方法和仪器。

发明背景

提供以下描述仅仅帮助理解本发明。引用的文献或提供的信息没有一个被承认是本发明的现有技术。

在美国，心血管疾病是死亡的主要原因。除了患者人口特征和当前的健康外，用于测定将来心脏病风险的最常用和接受的方法包括测定胆固醇和脂蛋白的血清浓度水平。存在完善确定的生化标志——包括例如但不限于胆固醇和脂蛋白水平——的截断值的推荐值，用于测定风险。然而，胆固醇和脂蛋白测量显然不是全部情况，因为多达50％的处于早期心脏疾病风险的人们目前没有被ATP III指南(即，由National Cholesterol EducationProgram and the National Heart，Lung and Blood Institute发布的Adult TreatmentPanel III guidelines)所包含。

测量血液中脂蛋白和其它脂质的方法包括例如但不限于评价禁食的总胆固醇、三酸甘油脂、HDL(高密度脂蛋白)和/或LDL(低密度脂蛋白)胆固醇浓度。当前，测量LDL胆固醇最广泛使用的方法是间接Friedewald方法(Friedewald等，Clin.Chem.，1972，18：499-502)。Friedewald测定方法需要三个步骤：1)测定血浆三酸甘油脂(TG)和总胆固醇(TC)，2)沉淀VLDL(极低密度脂蛋白)和LDL(低密度脂蛋白)，和3)定量HDL胆固醇(HDLC)。将VLDLC估算为血浆三酸甘油脂的五分之一，由公式：LDLC＝TC-(HDLC+VLDLC)计算LDL胆固醇浓度(LDLC)。虽然一般是有用的，但是在某些情况下Friedewald方法的准确度有限。例如，误差可能出现在三个步骤的任何一步中，部分因为这个方法要求在每个步骤中使用不同的方法。而且，Friedewald方法在某种程度上为间接的，因为它假定VLDLC浓度是血浆三酸甘油脂的五分之一。因此，当一些患者的VLDL偏离这个比例时，出现进一步的不准确。

评价血液脂蛋白的另一种方法考虑测量脂蛋白的大小和密度。由于遗传和非遗传的影响，脂蛋白的大小分布在个体中呈现不同。脂蛋白的直径一般为大约7nm到大约120nm的范围。在这个直径大小范围中，存在为心血管疾病重要预测物的微粒亚组分。例如，在血流中，VLDL运输三酸甘油脂；因此，血液中高的VLDL水平是高甘油三酯血症的指示。通过显示物质数量为脂蛋白大小或密度的函数的分析技术，可以识别这些亚组分。