[发明专利]神经肽sNPF和其受体基因及在桔小实蝇特异性控制剂中的应用

说明书

本发明公开了一种神经肽sNPF和其受体基因及在桔小实蝇特异性控制剂中的应用，提供了桔小实蝇神经肽sNPF基因如SEQ ID NO:9所示，其编码的蛋白质如SEQ ID NO:10所示；还提供了桔小实蝇神经肽sNPF成熟肽的核苷酸序列如SEQ ID NO:11～14所示，其编码的蛋白质如SEQ ID NO:15～18所示；还提供了桔小实蝇神经肽sNPF受体基因如SEQ ID NO:19所示，其编码的蛋白质如SEQ ID NO:20所示；还提供了上述核苷酸和氨基酸序列的应用，以及桔小实蝇神经肽sNPF基因和其受体基因的巢式PCR扩增方法。在制备实蝇杀虫剂方面有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于基因工程领域，具体涉及一种神经肽sNPF和其受体基因及在桔小实蝇特异性控制剂中的应用。

背景技术

柑桔是重要的经济作物，随着我国农业产业结构调整，柑桔产业规模不断扩大，已经逐渐成为多地区的支柱产业。桔小实蝇(Bactrocera dorsalis)由于其极强的环境适应能力和入侵扩散能力，严重危害多种重要经济果蔬，尤其是柑桔。目前，桔小实蝇已成为柑桔产业健康发展的巨大威胁。目前，桔小实蝇已对市面上的有机磷杀虫剂、拟除虫菊酯和阿维菌素等农药产生了严重的抗药性；农药残留严重污染环境，对食品安全造成了隐患；农药的特异性较低，威胁到有害生物天敌，有加剧农业有害生物爆发的风险。

短神经肽F(short neuropeptide F,sNPF)序列在不同种昆虫中具有较高保守性，其功能在昆虫中参与调控了进食、生长、应激反应、嗅觉、生殖、激素分泌、学习及记忆等多种生理活动。sNPF受体(sNPFR)属于G蛋白偶联受体(G-protein coupled receptor，GPCR)家族。目前，50％以上的临床用药以及正在研发中的药物以GPCR为作用靶标。据统计，全球20种最畅销药物中就有12个以GPCR为靶标，每年的销售总额达500多亿美元。因此，该类受体的整个信号传递系统在药物开发和设计中占有极其重要的地位。由于短神经肽在昆虫生理活动中的重要作用，以其受体(sNPFR)作为潜在靶标创制害虫特异的杀虫剂来达到控制桔小实蝇的方法受到越来越多的重视，也具有良好的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供神经肽sNPF和其受体基因及在桔小实蝇特异性控制剂中的应用。

在本发明的第一方面，提供一种桔小实蝇神经肽sNPF基因及其编码的蛋白质，所述桔小实蝇神经肽sNPF基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。

在本发明的另一方面，提供一种桔小实蝇神经肽sNPF基因的扩增方法，包括如下步骤：提取桔小实蝇总RNA，反转录为cDNA，以cDNA为模板采用巢式PCR的扩增方法，第一轮扩增的引物为sNPF-1-F和sNPF-1-R，第二轮扩增的引物为sNPF-2-F和sNPF-2-R，所述引物的序列为：

sNPF-1-F：GGAAAACAAAGCTGTACCAAC，

sNPF-1-R：CTGCTTTTGCCAATTATATAG，

sNPF-2-F：CAGCGTTCAAAATGTTCATGTC，

sNPF-2-R：GCATTTAATTTTTAGCTTGTGC。

在本发明的另一方面，提供一种桔小实蝇神经肽sNPF成熟肽(也称sNPFR配体)基因及其编码的蛋白质，所述桔小实蝇神经肽sNPF配体的核苷酸序列如SEQ ID NO:11～14所示，所述核苷酸序列编码的蛋白质的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:15～18所示。

在本发明的另一方面，提供一种桔小实蝇神经肽sNPF受体基因及其编码的蛋白质，所述桔小实蝇神经肽sNPF受体基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:19所示，其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:20所示。