[发明专利]调节性T细胞的扩增方法

说明书

技术领域

本发明涉及细胞领域，尤其涉及一种调节性T细胞的扩增方法。

背景技术

调节性T细胞(Regulatorycell，简称Treg)是一群具有免疫抑制效应的T 细胞亚群。对人体的免疫系统来说，Treg细胞无疑是把双刃剑。它对维持机体 免疫耐受和免疫应答稳态具有非常重要的作用，可以通过一系列机制抑制过强 的免疫应答，使得机体在自身损伤最小的情况下有效的清除抗原或病原体。控 制Treg细胞的数量与表达可以帮助我们控制疾病的进程。Treg细胞主要通过两 种方式发挥免疫抑制功能。第一种方式是Treg细胞可以通过分泌异质性细胞因 子等发挥免疫调节作用；第二种方式是Treg细胞主要通过细胞与细胞的直接接 触来发挥作用。

CD4⁺CD25⁺Treg细胞作为一类调节性T细胞，在自身反应性T细胞的增殖， 维持免疫耐受方面起着重要的作用。现有技术中采用免疫磁珠两步法分离 CD4⁺CD25⁺Treg细胞，并用CD4⁺CD25⁺Treg细胞专用的完全培养基和一定浓度 的IL-2培养扩增CD4⁺CD25⁺Treg细胞。在上述现有技术中使用的培养基成本较 高，免疫磁珠分选CD4⁺CD25⁺Treg细胞需要过柱，操作繁琐。而且，分离得到 的CD4⁺CD25⁺Treg细胞的扩增效率低。因此，如何简单分离并提高 CD4⁺CD25⁺Treg细胞的扩增效率，是当下研究的热点。

发明内容

有鉴于此，有必要针对上述的问题，提供一种调节性T细胞的扩增方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

调节性T细胞的扩增方法，将CD4⁺CD25⁺Treg细胞和hUC-MSCs共同培养。

优选地，所述CD4⁺CD25⁺Treg细胞和hUC-MSCs共同培养的方法为：

将hUC-MSCs接种到Transwell小室的上室，将CD4⁺CD25⁺Treg细胞接种 到Transwell小室的下室，共同培养14天，每隔2天对细胞进行补液。

优选地，所述hUC-MSCs的密度为1×10⁵cells/ml，CD4⁺CD25⁺Treg细胞的 密度为1×10⁶cells/ml。

优选地，共同培养时所使用的培养基为X-VIVO15培养基，其中添加 200-1000U/ml的IL-2和10-50ng/ml的Flt3(Fms-liketyrosinekinase,FMS样的 酪氨酸激酶3)。

优选地，CD4⁺CD25⁺Treg细胞通过以下方法制备：

S11、采用密度梯度离心法自血液中分离单个核细胞(PBMC)；

S12、自PBMC中分选出CD4⁺CD25⁺Treg细胞。

更优选地，所述血液为系统性红斑狼疮患者的血液。系统性红斑狼疮患者 因自身抗原免疫耐受缺失，导致淋巴细胞大量活化和增生、自身抗体大量产生 和炎性介质的大量释放。系统性红斑狼疮患者缓解期体内的CD4⁺CD25⁺Treg细 胞对由免疫过强而引起的自身免疫性疾病有很好的治疗效果。

更优选地，所述步骤S12使用EasySep^TM人CD4⁺CD25⁺T细胞分选试剂盒 自PBMC中分选出CD4⁺CD25⁺Treg细胞。

优选地，hUC-MSCs通过以下方法制备：

S21、去除脐带中的动静脉和羊膜；将脐带剪成碎块；用0.2m/v％的Ⅱ型胶 原酶消化液脐带碎块2-4h，2000rpm离心得到原代的hUC-MSCs；