[发明专利]一种人参种子无菌播种方法

说明书

技术领域

本发明属于人参组织培养技术领域，特别涉及一种人参种子无菌播种方法。

背景技术

人参是被子植物门双子叶植物纲离瓣花亚纲五加科，多年生草本植物，生长于密 林，多分布于黑龙江、吉林、辽宁和河北北部深山中，含有10多种人参皂甙，以及人参快醇、 多种氨基酸和维生素，是名贵的中草药材。

然而人参种子成熟后会积累大量抑制萌发的物质，阻止人参种子萌发，使人参种 子进入深度休眠，常规无菌播种方法萌发困难，萌发率低。

发明内容

基于现有技术存在上述问题，本发明提供一种人参种子无菌播种方法，该方法包 括种子表面消毒、接种前处理和接种等步骤，利用冷水浸泡模拟春化作用，再通过超声波处 理和KOH溶液浸泡处理，打破人参种子休眠，诱导人参种子萌发，本发明提供的人参种子无 菌播种方法具有成本低、萌发率高的优点。

一种人参种子无菌播种方法，其特战在于，其包括以下步骤：

步骤S10：取颗粒饱满的成熟人参种子，对种子进行冷水浸泡处理，然后于无菌环境中 对人参种子进行表面消毒；

步骤S20：对消毒完毕的人参种子进行超声波处理和KOH溶液浸泡处理；

步骤S30：将步骤S20处理完毕的人参种子接种到人参种子诱导培养基，并放入人工气 候箱中培养。

根据权利要求1所述的一种人参种子无菌播种方法，其特征在于，步骤S10中包括 S11，使用8-12℃的冷水对人参种子进行浸泡18-24小时，使用冷水浸泡可以模拟自然春化， 打破人参种子休眠。

根据权利要求1所述的一种人参种子无菌播种方法，其特征在于，步骤S10中包括 S12表面消毒，条件是用质量浓度为70-75%的酒精浸泡25-30秒，用无菌水冲洗3-5次，再用 质量浓度为0.10-0.12%的氯化汞溶液消毒6-8分钟，再用无菌水冲洗3-5次。

根据权利要求1所述的一种人参种子无菌播种方法，其特征在于，步骤S20包括步 骤S21，使用浓度为0.05-0.1mol/L的KOH溶液浸泡处理8-10分钟，用无菌水清洗冲洗3-5次， 使用低浓度的KOH可以腐蚀种子种皮，释放出种子内抑制萌发的的物质。

根据权利要求1所述的一种人参种子无菌播种方法，其特征在于，步骤S20包括步 骤S22，使用频率为50-60KHz、功率为80-90W的超声波对人参种子处理25-30分钟，超神波处 理可以调节人参种子的生理状态，促进种子萌发。

根据权利要求1所述的一种人参种子无菌播种方法，其特征在于，步骤S30中的培 养基是以1/2MS培养基为基础培养基，并添加1.0-1.2mg/L的萘乙酸、1.5-2.0mg/L的6-苄氨 基腺嘌呤、8-12g/L的琼脂粉和28-32g/L的白砂糖，高温灭菌制成。

根据权利要求1所述的一种人参种子无菌播种方法，其特征在于，步骤S30中的培 养条件是：光暗周期为14h光照/12h黑暗、光照强度为2000-2300lux的条件下培养至长成小 苗。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。

用天平根据表1所示的1/2MS培养基配方分别称取1/2MS培养基中的各成分以及 1.0mg的萘乙酸、1.5mg的6-苄氨基腺嘌呤、10的琼脂粉和30g的白砂糖，置于三角瓶中，加入 适量纯化水，搅拌溶解，定容至1000mL，并调节pH值至6.2。将三角瓶封口，置于高压灭菌锅 中，于121℃灭菌21min，然后于超净工作台中，将培养基分装至组织培养瓶中，自然冷却，待 其凝固后将组织培养瓶封口，备用。

表11/2MS培养基的成分及其用量。

取颗粒饱满的成熟人参种子，使用10℃的冷水对人参种子进行浸泡20小时，取出 种子，并于超净工作台中将种子用质量浓度为75%的酒精浸泡30秒，用无菌水冲洗4次，再用 质量浓度为0.12%的氯化汞溶液消毒6分钟，再用无菌水冲洗4次。

将上述清洗干净的人参使用浓度为0.07mol/L的KOH溶液浸泡处理9分钟，再用无 菌水清洗冲洗5次，取出种子并使用频率为55KHz、功率为85W的超声波对人参种子处理30分 钟，取出种子，备用。

将处理完毕的人参种子接种到上述配制好的人参种子诱导培养基，并放入人工气 候箱中培养，培养条件为光暗周期为14h光照/12h黑暗、光照强度为2000-2300lux的条件下 培养，培养到第15天时开始有第一颗种子萌发，长成人参无菌苗，培养22天后，超过90%的人 参种子萌发，诱导成无菌苗，种子萌发率高达90%，比常规诱导方法的萌发率高，常规诱导方 法平均萌发时间在25天以后，使用本发明提供的无菌播种方法可以缩短诱导时间。另外本 发明提供的无菌播种方法所选用的试剂和设备如KOH溶液和超声波设备等都属于常规实验 室设备，使用简单方便且成本低，可以大大降低诱导成本。