[发明专利]一种多酶体系的定向共固定化方法

权利要求书

1.一种多酶体系的定向共固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤一，利用带环氧键或羧基的载体材料上的功能基团，与3,5-二氨基苯甲酸的一个氨基进行反应，将3,5-二氨基苯甲酸的共价键接到载体材料上，获得接有3,5-二氨基苯甲酸的载体材料，以S-(3,5-DABA)表示；其中3,5-二氨基苯甲酸与载体材料的质量比为1-5:2；

步骤二，将步骤一得到的S-(3,5-DABA)与聚苯胺反应，反应通过S-(3,5-DABA)上氨基苯甲酸的氨基与聚苯胺反应，形成共价键，聚苯胺和S-(3,5-DABA)的质量比为1-5:10，获得接有聚苯胺的载体材料，以S-(3,5-DABA)-PANI表示；

步骤三，将黄素酶的辅基黄素腺嘌呤二核苷酸上的氨基，与步骤二所得S-(3,5-DABA)-PANI进行反应，通过S-(3,5-DABA)-PANI上苯甲酸的羧基与黄素腺嘌呤二核苷酸的氨基反应，形成共价键，载体材料与黄素腺嘌呤二核苷酸的质量比为1-5:2，经酰胺键连接，获得接有黄素腺嘌呤二核苷酸的载体，以S-(3,5-DABA)-PANI-FAD表示；

步骤四，氧化物酶的辅基—氯化血红素上的羧基，与步骤三所得S-(3,5-DABA)-PANI-FAD进行反应，通过S-(3,5-DABA)-PANI-FAD上的聚苯胺的氨基进行反应，形成共价键，所得产物以S-(3,5-DABA)-PANI-FAD-Hemin表示；用还原剂对产物进行还原处理，还原剂与产物的质量比为8000-500:5；其中，氯化血红素与S-(3,5-DABA)-PANI-FAD的质量比为1:1-5。

步骤五，将脱辅基的黄素酶、脱辅基的过氧化物酶与步骤四中S-(3,5-DABA)-PANI-FAD进行亲和吸附，脱辅基的脱辅基的黄素酶、脱辅基的过氧化物酶与载体的质量比为1:1：1-5，获得定向共固定化的多酶体系。

2.根据权利要求1中所述的一种多酶体系的定向共固定化方法，其特征在于，步骤一中所述的载体材料为氧化石墨烯、石墨烯、碳纳米管、或石墨中的至少一种。

3.根据权利要求1中所述的一种多酶体系的定向共固定化方法，其特征在于，步骤三中所述的黄素酶为葡萄糖氧化酶(GOx)、胆固醇氧化酶、琥珀酸脱氢酶、D-氨基酸氧化酶、或脂酰CoA脱氢酶中的至少一种。

4.根据权利要求1中所述的一种多酶体系的定向共固定化方法，其特征在于，步骤五中所述的过氧化物酶为细胞色素、过氧化氢酶、或过氧化物酶中的至少一种。

5.根据权利要求1中所述的一种多酶体系的定向共固定化方法，其特征在于，步骤四中所述的还原剂为水合肼、硼氢化钠、或柠檬酸钠中的至少一种。