[发明专利]一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性性状的分子标记gga-miR-1416-5p及其检测方法在审
| 申请号： | 201610015294.4 | 申请日： | 2016-01-11 |
| 公开（公告）号： | CN105462982A | 公开（公告）日： | 2016-04-06 |
| 发明（设计）人： | 李显耀;吴桂贤;刘丽英;刘肖意 | 申请（专利权）人： | 山东农业大学 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12Q1/68 |
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| 地址： | 271018 *** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 肠炎 沙门氏菌 感染 抗性 性状 分子 标记 gga mir 1416 及其 检测 方法 | ||
1.一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性性状的分子标记，该抗性分子标记为鸡miRNAgga-miR-1416-5p，其核苷酸序列如SEQIDNO:1所示。
2.权利要求1所述鸡肠炎沙门氏菌感染抗性性状的分子标记检测方法，具体步骤如下：
gga-miR-1416-5p的表达量检测
miRNA反转录
用OneStepmiRNAcDNASynthesisKit试剂盒，严格按说明书进行；反转录体系为20μL，如表1所示；反应程序为：37℃，60min；85℃，5s；反应完成后获得的cDNA置于-20℃保存备用；
表1miRNA反转录体系(20μL)
gga-miR-1416-5p荧光定量PCR
根据gga-miR-1416-5p成熟序列设计引物，如表2所示；利用所设引物，采用SYBRGreenI染料法，按照TaKaRa公司的SYBRPrimeScriptmiRNART-PCRKit说明书，在StratageneMX3000P荧光定量PCR仪上进行扩增，反应体系如表3所示；
表2miRNA定量检测引物
表3荧光定量PCR体系
荧光定量PCR反应程序采用两步法：95℃预变性30s，1个循环；95℃5s，60℃30s，40个循环；最后添加溶解曲线(95℃1min，62℃30s，95℃30s)，1个循环，每个cDNA样品重复三次；以U6作为内参基因，用2-ΔΔCt方法来计算miRNA的相对表达量，用SAS8.1软件中单因素方差分析对gga-miR-1416-5p表达量差异进行分析。
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