[发明专利]一种检测吡虫啉的胶体金试纸条及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测吡虫啉的胶体金试纸条及其应用，具体涉及一种用于检测吡虫啉的胶体金试纸条，其特别适用于烟草中吡虫啉残留的检测。

背景技术

吡虫啉(IMI)，1-(6-氯-3-吡啶甲基)-N-硝基-2-咪唑啉亚胺，属于新型烟碱类杀虫剂。IMI是昆虫烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)抑制剂，通过阻止IMI刺激AchR引起的昆虫神经信号传导而发挥杀虫作用，其兼具触杀、驱避、胃毒等多重杀虫活性和高效、低毒、广谱、内吸、残效期长等特点。近年来，吡虫啉已经广泛应用于水稻、棉花、茶树、大豆、烟草等作物来防治飞虱、介壳虫、白粉虱等农业害虫，而对烟草生产过程中的蚜虫、叶蝉等刺吸式口器害虫有特效。目前含IMI的农药产品已在120多个国家的140余种农作物上登记使用，在世界范围内吡虫啉的使用量已居所有杀虫剂的首位。该农药会对人类和哺乳动物产生慢性毒理效应，0.05mg/kg的吡虫啉就会损害人体淋巴细胞的遗传物质DNA。

目前国内外已制订出多种农产品中IMI的最大残留限量标准(MRLs)。2008年欧盟重新审理和修正了IMI在近400中农产品中的MRLs，其中大部分谷物、水果、蔬菜中的MRL均在0.05mg/kg。而随着烟草和烟草制品的国际贸易日趋增加，一些发达国家已经制定了烟草及烟草制品中农药残留量的最大限量法规，如美国农业部1987年就制定了对进口烟草农药残留的限量指标，包括19种农药，世界上其它一些国家对多种农药在烟草(烟草制品)中的最大残留量制定了标准。综合德国、美国、西班牙和意大利制定的国家标准，对卷烟和烟叶中农药残留最高限量做出规定的就多达151种农药。为了提高烟草安全性，烟草科学研究合作中心制定了严格的农药最高残留限量标准，这是我国烟草贸易必须面对的技术壁垒。

吡虫啉是极性化合物，具热不稳定性的特点，检测吡虫啉残留量常规方法有气相色谱法(GC)、高效液相色谱法(HPLC)、气质联用法(GC-MS)、免疫分析法(ELISA)等方法。然而采用这些检测方法需要昂贵的仪器和专门的技术人员，样品前处理过程复杂且花费高、费时长，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适于烟草中吡虫啉残留的胶体金试纸条，可满足大量样品现场筛选和监控，能够更好地满足我国烟草公司、烟草监管部门等开展检测工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够检测烟草中吡虫啉残留量的胶体金试纸条，并且提供一种高效、准确、简便、适于现场监控和大量样本筛查的检测方法。

本发明所提供的检测吡虫啉的胶体金试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；所述反应膜上具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫喷涂有吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物。

所述吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物是由吡虫啉半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白。

所述吡虫啉半抗原是以2-氯-5-甲基吡啶-3-甲醛为起始原料，经过溴代反应，得到中间体2-氯-5-甲基溴代吡啶-3-甲醛产物，而后与2-硝基亚氨基咪唑烷进行亲核取代反应，得到醛基化的吡虫啉产物，最后与氨基乙酸缩合，获得带有四碳链长度间隔臂的羧基吡虫啉半抗原产物，其分子结构式为：

所述吡虫啉单克隆抗体是以吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述羊抗鼠抗抗体是将鼠源抗体免疫羊得到。

所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：

1)制备喷涂有吡虫啉单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；

2)制备具有包被有吡虫啉半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。

具体地说，步骤包括：