[发明专利]一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性性状的分子标记gga-miR-34a-5p及其检测方法

说明书

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性分子标记及其检测方法，该抗性分子标记为鸡miRNA gga‑miR‑34a‑5p，发明人经过研究发现，gga‑miR‑34a‑5p可以通过调控NOTCH2基因的表达调控肠炎沙门氏菌对鸡的感染，因此gga‑miR‑34a‑5p可以作为肠炎沙门氏菌感染抗性检测的分子标记，发明人进一步提供了其检测方法，从而为鸡的抗病遗传育种奠定基础。

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性性状的分子标记gga-miR-34a-5p及其检测方法。

背景技术

肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis)为革兰氏阴性菌，是世界公认的食源性致病菌之一，不仅对蛋鸡生产造成重大影响，而且它能通过家禽副产品给人类的健康带来很大的威胁。这种病菌主要是通过动物性产品包括禽肉，鸡蛋和奶类及奶制品等导致人中毒甚至死亡。因此如何获得抗性高的遗传个体成为亟待解决的问题之一。

小RNA(miRNA)是一类长度约22nt的内源性非编码小RNA，与靶基因3′UTR(非翻译区)结合在转录后水平调控靶基因的表达，在细胞增殖、分化、凋亡、神经发育、脂肪代谢等多个生物学过程中发挥重要作用。

发明内容

本发明的发明人针对上述现有技术的情况，结合长期研究和探索，提供了一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性性状的分子标记及其检测方法，该抗性分子标记为鸡miRNA gga-miR-34a-5p，发明人经过研究发现，gga-miR-34a-5p可以通过调控NOTCH2基因的表达调控肠炎沙门氏菌对鸡的感染，因此gga-miR-34a-5p可以作为肠炎沙门氏菌感染抗性检测的分子标记，发明人进一步提供了其检测方法，从而为鸡的抗病遗传育种奠定基础。

发明人提供的具体技术方案如下：

发明人首先提供了一种鸡肠炎沙门氏菌感染抗性性状的分子标记，该抗性分子标记为鸡miRNA gga-miR-34a-5p，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示；

发明人进一步给出了该分子标记的检测方法如下：

gga-miR-34a-5p的表达量检测

miRNA反转录

用One StepmiRNA cDNA Synthesis Kit(Perfect Real Time)试剂盒，严格按说明书进行。反转录体系为20μL(具体见表1)。反应程序为：37℃，60min；85℃，5s；反应完成后获得的cDNA置于-20℃保存备用；

表1 miRNA反转录体系(20μL)

其中所述的盲肠总RNA为鸡盲肠总RNA，采用常规方法获得，

gga-miR-34a-5p荧光定量PCR

根据gga-miR-34a-5p成熟序列设计引物(表2)，由上海生工生物工程有限公司合成。利用所设引物，采用SYBR Green I染料法，按照TaKaRa公司的SYBR PrimeScriptTMmiRNA RT-PCR Kit说明书，在Stratagene MX3000P荧光定量PCR仪上进行扩增，反应体系如表3所示。

表2 miRNA定量检测引物

其中>gga-34a-5p和U6分别作为Forward qPCR Primer，而Uni-miR qPCR Primer选用试剂盒中自带引物；