[发明专利]人源DNA甲基化分析中重亚硫酸盐转化DNA转化效率的评估方法

权利要求书

1.一种人源DNA甲基化分析中重亚硫酸盐转化DNA转化效率的评估方法，其特征在于，包括 以下步骤：

(1)设计并扩增DNA标准品及引物和探针：

1)标准品1：是指与人源的β-actin上游一段不包含CG位点DNA同源的序列，该序列未 经重亚硫酸盐转化；

2)标准品2：是指标准品1中未甲基化的胞嘧啶全部转化为尿嘧啶后的序列；

3)引物1和探针1：是指根据标准品1的序列设计的用于扩增标准品1的检测引物和探针；

4)引物2和探针2：是指根据标准品2的序列设计的用于扩增标准品2的检测引物和探针；

(2)使用重亚硫酸盐转化人源的DNA，使DNA中未甲基化的胞嘧啶转化为尿嘧啶；

(3)以未转化的任意人源DNA和相应转化的DNA的样本为模板，分别使用对应的引物1 和引物2应用Taq酶进行PCR扩增并纯化分别制备标准品1和标准品2；

(4)使用所述引物1和探针1以及引物2和探针2，以所述标准品1与标准品2按照梯 度稀释为模板，分别做标准曲线，其中标准曲线以模板的拷贝数CN对应相应的Ct值；

(5)将待测的人源的DNA样本使用重亚硫酸盐进行转化；

(6)使用引物1和探针1以及引物2和探针2，以步骤(4)转化后的DNA样本为模板， 分别检测转化后人源DNA样本中未转化的DNA与转化的DNA的Ct值；再根据步骤(4)中的标 准曲线，计算出样本中未转化的DNA与转化的DNA相应的拷贝数；

(7)使用计算公式：重亚硫酸盐转化DNA转化率(％)＝转化的DNA拷贝数/(未转化的DNA 拷贝数+转化的DNA拷贝数)×100％，计算转化率。

2.根据权利要求1所的方法，其特征在于，所述的标准品1的序列如SEQIDNO.1所示，标 准品2的序列如SEQIDNO.2所示。