[发明专利]一种与奶牛体细胞评分相关的分子标记及其应用

权利要求书

1.用于检测与奶牛体细胞评分相关的SNP分子标记的引物对，其特征在于，所述引物对为SEQ ID NO.1所示的上游引物与SEQ ID NO.2所示的下游引物，或为SEQ ID NO.4所示上游引物与SEQ ID NO.5所示的下游引物。

2.用于筛选低体细胞评分或降低奶牛体细胞评分的试剂盒，该试剂盒包括权利要求1所述引物对。

3.根据权利要求2所述试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Tag DNA聚合酶、Mg²⁺和PCR反应液。

4.一种用于筛选低体细胞评分或降低奶牛体细胞评分的试剂盒，该试剂盒包括：SEQID NO.4所示上游引物与SEQ ID NO.5所示的下游引物；dNTPs、Tag DNA聚合酶、Mg²⁺和PCR反应液；FastDigest限制酶ManlI，酶切缓冲液。

5.权利要求1所述引物对或权利要求2-4任一项所述试剂盒在鉴定和/筛选体细胞评分低的奶牛优势品种中的应用。

6.一种降低奶牛SCS的辅助育种方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取奶牛基因组DNA为模板；

(2)利用SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的引物进行PCR扩增；

(3)将PCR产物用FastDigest限制酶ManlI进行切割，琼脂糖凝胶电泳检测酶切产物，并最终根据电泳结果进行判定：电泳显示有300bp、70bp两条带的是GG基因型，电泳显示有370bp、300bp、70bp三条带的是GA基因型，电泳显示仅有370bp一条带的是AA基因型，AA基因型个体的SCS显著高于其它基因型个体的SCS，选择SCS低的基因型作为候选基因的功能性分子标记，用于奶牛辅助育种。

7.根据权利要求6所述方法，其特征在于，PCR扩增反应的条件是：第一步预变性，温度94℃，时间5min；第二步35个循环，包括94℃变性30s，58℃退火50s，72℃延伸30s；第三步终延伸，温度72℃，时间10min。