[发明专利]一种国槐子叶体细胞胚诱导的成套培养基

说明书

本发明公开了一种国槐子叶体细胞胚诱导的成套培养基，包括体细胞胚诱导培养基、不定芽诱导培养基、壮苗培养基和生根培养基。使用本发明的培养基繁殖国槐幼苗，可省去先建立国槐快繁再生体系这一步骤，大大节省时间。再生率高、出芽多，植株移栽成活率可达到90％以上，种苗生长健壮，不但可有效解决优良种苗种质退化问题，还可为国槐遗传转化或诱变育种提供一个理想的受体系统。

技术领域

本发明涉及一种国槐子叶体细胞胚诱导的成套培养基，属于植物生物技术领域。

背景技术

国槐(Sophora japonica Linn)，别名家槐、中国槐，属蝶形花亚科、槐属，是理想的行道树种和庭院绿化树种。而且,国槐材质优良，花、果实、根皮、树皮可入药，种子可榨油制皂，具有较高的经济价值，应用前景十分广阔。同时，国槐又是嫁接龙爪槐、金枝槐、聊红槐、蝴蝶槐等观赏品种的唯一砧木树种，苗木需求大。国槐主要以种子繁殖为主，但其开花结果具有大小年现象，且种子易受病虫害危害，干瘪、空洞现象严重。常规的育种方法，依靠种子或扦插繁殖，难以满足生产的需求。

近年来，利用生物技术培育具有抗性如抗逆、抗虫、抗病等新型品种是国槐育种的新趋势。到目前为止，对槐树的形成层培养、茎培养、叶片培养、胚培养、未授粉子房的培养均已获得了完整的植株，对原生质的培养也取得了一定的进展。袁秀云等利用国槐的子叶和下胚轴产生了不定芽，王喆之等利用花药培养形成了单倍体植株，Han K.H等(1993，1997)将直径为0.5～1.0cm的枝条消毒后，取出形成层接入愈伤诱导培养基中诱导愈伤，再将愈伤组织转入分化培养基中，获得了丛生芽，将成苗转入生根培养基中，可诱导生根。上述的方法存在的缺点：由于国槐为多年生木本植物，其再生率普遍较低，出芽少，直接影响了国槐的遗传转化。利用植物体胚诱导技术不但能达到保存母株优良基因、快速繁育的目的，还是提高基因遗传转化或诱变育种的重要途径。目前，有关国槐的体细胞胚诱导技术研究的较少，可以参考的现有技术比较少。查阅文献，可以看到别的树种也有人在做体胚诱导，国槐为多年生乔木，基因组庞大，鉴于基因型的限制，没有参考价值。

国槐的离体叶片、根尖等均可诱导产生胚状体。其前提条件是首先要建立一个稳定的高频再生系统，只有这样，才能提供充足的无菌离体材料。在山东地区，国槐小峰的危害非常严重，要采集国槐种子，必须在国槐花序刚刚形成开始至授粉形成果荚期间在要采摘的国槐树及其周边均要喷洒农药,防止国槐小蜂寄存在种子中。果荚膨大成熟后,既可采收种子。专利CN 102499086 A公开了一种刺槐的繁殖方法，由于国槐与刺槐分属不同的属，物种差别较大，不能参考刺槐荚果的体细胞培养方法得到国槐子叶的体细胞培养。

发明内容

本发明的目的就是为了解决上述问题，提供一种国槐子叶体细胞胚诱导的成套培养基，以解决国槐再生率低下的问题。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种国槐子叶体细胞胚诱导的成套培养基，包括

体细胞胚诱导培养基：A+3.0～5.0mg/L 2,4-D(2，4-二氯苯氧乙酸)+0.5～1.0mg/L BA+0.5～1.0mg/L NAA(萘乙酸)+0.1～0.5mg/L TDZ+0.5～1.0mg/L谷氨酰胺+0.5～1.0mg/L CH(水解酪蛋白)+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；

不定芽诱导培养基：A+0.1～0.5mg/L BA+0.1～0.5mg/L NAA+0.5～1.0mg/L谷氨酰胺+0.5～1.0mg/L CH(水解酪蛋白)+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；

试管苗增殖培养基配方:MS+1.0～2.0mg/L BA(6-苄基腺嘌呤)+1.0～2.0mg/LIBA(吲哚丁酸)+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖,pH值5.8～6.0；

壮苗培养基：MS+5.0g/L琼脂+30g/L蔗糖，pH值5.8～6.0；