[发明专利]一种DNA探针组合和试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测领域，更具体地，涉及一种DNA探针组合和包括该DNA探针组合的试剂盒。

背景技术

微小RNA(miRNA)是一类小分子调控RNA，在肿瘤的发生与控制方面发挥着重要的作用。已经发现在肿瘤患者的循环核酸中存在源自肿瘤的miRNA分子，这一现象提示循环miRNA分子可能成为无创诊断癌症的一个有效的方法。研究表明miR-21，miR-145，miR-222，miR-223，miR-29a，miR-10b在肝癌肿瘤患者血清中明显过度表达，是评估疗效的潜在生物标志物。miR-16的表达稳定，可作为内参。

目前已有的血清中miRNA的检测方法主要是实时荧光定量PCR(QuantitativeReal-timePCR)，所谓实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。

但是这个方法需要先对miRNA进行逆转录，并且RT-PCR的过程需要完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环。操作繁琐，并且需要使用大型昂贵的仪器。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术的上述缺陷，提供一种DNA探针组合和包括该DNA探针组合的试剂盒。

本发明的发明人拟利用RCA技术对血清中miRNA进行检测，DNA滚环扩增(RCA)技术是一种等温信号扩增方法，可在室温下进行，使用两个引物就可实现指数滚环扩增，可用于极微量生物标记物的检测。RCA能直接扩增DNA或者RNA分子，所以将其用于血清中miRNA的检测具有快速、灵敏、特异的特点。此外，发明人发现如果只对某一特定的miRNA表达量进行分析，很容易出现假阳性或假阴性的结果。

基于此，本发明提供一种DNA探针组合，该DNA探针组合包括：

(1)miR-223探针，所述miR-223探针为40-80nt的通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：

5’-GACAAACTGACA(SEQIDNO：1)X₁TGGGGTATTT-3(SEQIDNO：2)’，X₁为任意序列的DNA片段；

和(2)miR-16探针，所述miR-16探针为40-80nt的通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：

5’-TACGTGCTGCTA(SEQIDNO：3)X₂CGCCAATATT(SEQIDNO：4)-3’，X₂为任意序列的DNA片段；

以及以下探针中的至少两种：

(3)miR-21探针，所述miR-21探针为40-80nt的通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：

5’-TGATAAGCTA(SEQIDNO：5)X₃TCAACATCAGTC(SEQIDNO：6)-3’，X₃为任意序列的DNA片段；

(4)miR-29a探针，所述miR-29a探针为40-80nt的通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：

5’-AGATGGTGCTA(SEQIDNO：7)X₄TAACCGATTTC(SEQIDNO：8)-3’，X₄为任意序列的DNA片段；

(5)miR-222探针，所述miR-222探针为40-80nt的通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：

5’-CAGATGTAGCT(SEQIDNO：9)X₅ACCCAGTAGC(SEQIDNO：10)-3’，X₅为任意序列的DNA片段；

(6)miR-145探针，所述miR-145探针为40-80nt的的通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：

5’-GGAAAACTGGAC(SEQIDNO：11)X₆AGGGATTCCTG(SEQIDNO：12)-3’，X₆为任意序列的DNA片段；

(7)miR-10b探针，所述miR-10b探针为40-80nt的通过以下DNA序列5’端和3’端连接而成的环状DNA模板：