[发明专利]伏马毒素B1核酸适配体链置换探针的筛选及应用

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及核酸适配体的应用与开发，具体为伏马毒素B₁核酸适配体链置换探针的筛选及应用。本发明公开了FB₁核酸适配体链置换探针的筛选，为后续基于FB₁核酸适配体链置换探针的信号放大传感技术研发奠定了基础。基于该链置换探针的FB₁荧光偏振检测技术采用FB₁核酸适配体作为分子识别元件，与基于抗体的免疫检测技术相比，具有成本低廉、特异性高的特点，且该技术为均相检测技术，重现性好，操作简单方便且可实现大量样品的平行检测，有助于建立适合我国国情的农产品伏马毒素监控技术体系，满足当前我国对农产品伏马毒素污染监控关键技术的迫切需要，对保障农产品消费安全和人民生命健康意义重大，应用前景广阔。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及核酸适配体的应用与开发，具体为伏马毒素B₁核酸适配体链置换探针的筛选及应用。

背景技术

伏马毒素(fumonisin)是一类主要由串珠镰刀菌产生的真菌毒素。伏马毒素主要存在于玉米及其制品中，此外还存在于大米、小麦、大麦、高粱、豌豆、芦笋、啤酒、牛奶和饲料等农产品及其加工品中。调查表明：世界各国的玉米及其制品，无论是人食用的食品还是动物用的饲料，普遍都受到伏马毒素的污染，其中玉米的污染率达60％以上。目前至少已鉴定出15种伏马毒素类似物，其中伏马毒素B₁(FB₁)的毒性最强。研究证实，伏马毒素可引起马脑白质软化症和猪肺水肿综合症。世界卫生组织国际肿瘤研究中心(IARC)于1993年评价了伏马毒素的毒性，并将其归类为可能的人类致癌物；国际食品法典委员会(CAC)的 JECFA最近的评价结果指出其具有肾脏毒性。农产品中存在的伏马毒素已成为相关农产品安全消费、国际贸易和现代农业产业发展的限制因素，对人的健康和畜牧业发展构成潜在危害。因此，研究建立科学先进、准确可靠的伏马毒素系列监控技术，是控制我国农产品伏马毒素污染、保障农产品安全消费和人民身体健康的迫切需求。

由于伏马毒素不具有强的紫外吸收和荧光基团，因此不像其它真菌毒素那样易于分析检测。基于抗体的免疫检测技术是真菌毒素的主流检测技术，其中作为快速检测技术的荧光偏振检测技术在国外已经比较成熟，但是其所用的FB₁荧光标记物如6-(4，6-二氯三嗪基)氨基荧光素(6-DTAF)相当昂贵，导致检测成本较高，不利于该技术的大面积推广应用。

核酸适配体作为一类单链寡核苷酸，与靶分子发生特异性相互作用前后空间构象会发生相应的变化，与抗体相比具有可体外筛选获得、热稳定性好、易于化学合成和修饰等优点，甚至能区分单抗无法实现的单个取代基差别的靶分子。2010年，Maureen McKeague报道了伏马毒素B₁的核酸适配体(Int.J.Mol.Sci.2010，11：4864-4881；doi:10.3390/ijms11124864)，但是针对该核酸适配体的相关应用报道较少。

针对我国农产品质量安全检测的需求，充分利用荧光偏振检测技术和核酸适配体技术的优势，本发明公开了FB₁核酸适配体链置换探针的筛选，并开发了基于该链置换探针的FB₁荧光偏振检测技术，有助于建立适合我国国情的农产品伏马毒素监控技术体系，满足当前我国对农产品伏马毒素污染监控关键技术的迫切需要，对保障农产品消费安全和人民生命健康意义重大，应用前景广阔。

发明内容

本发明的目的在于提供一种伏马毒素B₁核酸适配体的链置换探针，并提供基于该链置换探针的伏马毒素B₁荧光偏振检测方法，具有特异性高、稳定性好、经济的特点。

为实现上述目的本发明采用以下技术方案：

一种伏马毒素B₁核酸适配体链置换探针，所述置换探针为一段单链寡核苷酸，其序列如 SEQ ID NO：1。

所述探针5’端修饰有FAM荧光基团。