[发明专利]一种鼠尾藻多糖的提取方法

权利要求书

1.一种鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：包括以下处理步骤，

a、恒温水浴处理：将鼠尾藻和稀酸溶液以重量比为1：120，在恒温水浴锅97℃水浴200～220min，去除固体杂质，得到提取液，提取液用4mol/L的NaOH中和至pH=7.0；

b、提取液预处理：将提取液进行浓缩、冷却至室温，加4倍体积无水乙醇醇沉，置4℃冰箱过夜，离心弃上清，加蒸馏水溶解沉淀，对得到的溶液反复冻融，离心除杂，冷冻条件为-20℃，溶解条件为50℃，重复7次，然后采用冷冻干燥机干燥，得到粗品1；

c、粗品1脱蛋白：粗品1按重量比1:25溶于蒸馏水，得到糖液，然后加入糖液总体积1/4体积的sevage试剂，充分震荡3h，离心取上层糖液，重复12次；对糖液冻融，离心除去杂质，冷冻条件为-20℃，溶解条件为50℃，重复5次，然后采用冷冻干燥机干燥，得到粗品2；

d、对得到的粗品2进行分离纯化。

2.根据权利要求1所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步骤a的稀酸溶液为盐酸。

3.根据权利要求1或2所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步骤b总采用旋转蒸发仪进行浓缩，所述旋转蒸发仪的温度控制在70～75℃。

4.根据权利要求3所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步骤c所述的sevage试剂为氯仿与正丁醇按重量比4:1混合而成。

5.根据权利要求4所述的鼠尾藻多糖的提取方法，其特征在于：步骤d的分离纯化方法具体为：（1）凝胶的预处理：将凝胶置于真空干燥器中，连接循环水式真空泵，进行间歇抽真空，抽气30～35分钟，休息5-10分钟，并用玻璃棒搅拌，使其松散，使凝胶里的气体可以全部抽出；（2）装柱与平衡：将层析柱夹持在铁架台上，保持垂直，从柱顶端倒入平衡缓冲液，待气泡排除后，使蒸馏水在柱内保持3～5cm高度，关闭柱出口，用玻璃棒轻轻搅匀凝胶悬浮液，待凝胶沉淀，打开恒流泵，调节流速在60～65mL/h，用2000～2100mL的蒸馏水平衡，使之紧密结实；（3）上样检测与收集：取500mg粗品2溶于10mL蒸馏水，将柱上层缓冲液吸出与凝胶表层持平后，吸取样品溶液沿层析柱内壁同一方向旋转缓慢加入，使样品在胶柱表面分布均匀；加完后，打开恒流泵，使样液进入柱体，待柱体上表面剩余1～2mm样液时，沿层析柱内壁同一方向，旋转缓慢加入蒸馏水，将壁上的粘着液洗下，然后继续按此方法加入蒸馏水至距胶柱上表面约8cm高度；封盖柱体，调节流速60～65ml/h，先后分别用蒸馏水洗脱、1mol/LNaCl线性梯度洗脱；设定12min收集一管，每管12ml，自动部分收集器收集100管；用苯酚-硫酸法测定糖含量分布情况，用紫外分光光度法测定蛋白质含量分布情况，记录数据并制作洗脱分布图，根据波峰范围部分收集洗脱液；用截留分子量3500的透析袋对收集液自来水流水透析24h,然后蒸馏水透析24h,透析完成后进行旋转蒸发浓缩，冷冻干燥机冻干，即得到鼠尾藻多糖。