[发明专利]131I标记的c(RGDyk)靶向阿霉素热敏纳米脂质体及其制备与应用

权利要求书

1.¹³¹I标记的c(RGDyk)靶向阿霉素热敏纳米脂质体，其特征在于： 所述的¹³¹I标记的c(RGDyk)靶向阿霉素复合热敏纳米脂质体的结构 为：¹³¹I与c(RGDyk)相偶联，c(RGDyk)则通过磷脂-聚乙二醇-活性酯 (DSPE-PEG-NHS)活化插入包裹阿霉素及磁性颗粒的脂质体的二棕 榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)分子层中。

2.如权利要求1所述的¹³¹I标记的c(RGDyk)靶向阿霉素热敏纳米脂 质体，其特征在于：所述的c(RGDyk)是含有精-甘-天冬氨酸序列的环 肽，其中含有精-甘-天冬氨酸序列，并包含酪-赖氨酸，由酰胺键-成 环。

3.如权利要求2所述的¹³¹I标记的c(RGDyk)靶向阿霉素热敏纳米脂 质体，其特征在于：所述的赖氨酸可由其他氨基酸取代。

4.如权利要求1所述的¹³¹I标记的c(RGDyk)靶向阿霉素热敏纳米脂 质体，其特征在于：其阿霉素由其他抗乳腺癌的水溶性药物替代，水 溶性药物包括吉西他滨或米托蒽醌。

5.¹³¹I标记的c(RGDyk)靶向阿霉素热敏纳米脂质体制备，其特征在 于：所述制备包括以下步骤：

(1)采用改良化学共沉淀法制备铁氧磁性纳米粒子：

在N₂气条件下将FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O按n(Fe²⁺)∶n(Fe³⁺)摩 尔比2-3：1溶于去离子水中，将浓度为0.4-1.0mol/L的氨水缓慢滴入该 溶液中，同时通过磁力搅拌混匀，通过水解产生黑色的晶体粒子，再 继续滴入氨水，调pH至8.0-10.0，使溶液呈碱性，加热使磁铁分散开， 离心并洗涤，将沉淀加入到酸性溶液中，在温度60-80℃下经胶溶化 处理得到棕色胶体溶胶；

(2)碘化反应：

称取c(RGDyk)溶于甲醇/乙醇、pH＝7.4的PBS中，配制成10mg/mL 的RGD环肽溶液，甲醇/乙醇与PBS的体积比为1：10-50；称取氯胺-T 和偏重亚硫酸钠，配制成相应溶液，将¹³¹I加入至RGD环肽溶液与氯 胺-T混合液中，每500-50000μCi¹³¹I对应0.5-1mgRGD环肽溶液和 10-50μg氯胺-T，室温反应0.5-30min，加入偏重亚硫酸钠终止反应， 偏重亚硫酸钠与氯胺-T重量比为1：1；将产物对应与15ml水混合过 C18柱，并再用15ml水淋洗C18柱2-4次，每次均测定C18柱的放射活 性，淋洗至其放射性不发生改变为止，再用盐酸乙醇作为淋洗液，回 收标记上¹³¹I的c(RGDyk)；

(3)脂质体制备：

称取DSPE-PEG-NHS溶于新鲜蒸馏的无水无氨的DMF中，终浓 度为1mg-5mg/ml，将DSPE-PEG-NHS溶液逐滴加入¹³¹I-cRGD溶液 中，DSPE-PEG-NHS与¹³¹I-cRGD的摩尔比为3∶1-2，室温避光搅拌， 1天后终止反应，反应液置Mw2000透析袋中，于去离子水中透析12h 后冷冻干燥；

准确称量DPPC、胆固醇、DSPE-PEG-NHS-¹³¹I-cRGD混合置于茄 形瓶中，DPPC、胆固醇与DSPE-PEG-NHS-¹³¹I-cRGD的质量比为8：1： 1，加入体积比为2:1的氯仿和甲醇的混合液，混合液与胆固醇的体积 重量比为9:2ml/mg，超声混匀后，旋转蒸发形成白色、均匀的脂质薄 膜；

配制pH4.0的柠檬酸溶液，加入与柠檬酸溶液质量比为1：60-300 的Fe₃O₄纳米粒子，超声混匀，用此溶液对磷脂膜进行水化，制备脂 质体；将所得脂质体加入与柠檬酸溶液体积比为1：100-500的1mg/ml 盐酸阿霉素，并用1mol/LNa₂HPO₄将pH值调至7.0，水浴即得修 饰¹³¹I-cRGD的载阿霉素磁性脂质体。