[发明专利]用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物、探针及试剂盒

权利要求书

1.用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的试剂盒，其特征在于，包括用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物和探针、外控引物和探针，以及内控引物和探针；

用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物和探针的核苷酸序列如下：

突变上游ARMS引物PM1-F：SEQ ID NO:1，

突变下游引物PW1-R：SEQ ID NO:2，

检测探针PW1-P：SEQ ID NO:3，

阻断探针PW1-B：SEQ ID NO:4；

其中，检测探针核苷酸序列5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；阻断探针的核苷酸序列5’端经过双脱氧修饰，3’端标记有淬灭基团；

外控引物和探针的核苷酸序列如下：

外控上游引物PR-F：SEQ ID NO:5，

外控下游引物PR-R：SEQ ID NO:6，

外控检测探针PR-P：SEQ ID NO:7，外控检测探针核苷酸序列的5’端标记有FAM，3’端标记有MGB；

内控引物和探针的核苷酸序列如下：

内控上游引物IC-F：SEQ ID NO:8，

内控下游引物IC-R：SEQ ID NO:9，

内控检测探针IC-P：SEQ ID NO:10，内控检测探针核苷酸序列的5’端标记有JOE，3’端标记有BHQ1。

2.根据权利要求1所述的用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的试剂盒，其特征在于，所述荧光基团为FAM，所述淬灭基团为MGB。

3.根据权利要求1所述的用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的试剂盒，其特征在于，还包括阳性对照品和内控品，阳性对照品包括含有发生2525A>T碱基变化的PDGFRA基因片段>gi|568815594:54285801-54286200的阳性质粒，含有PDGFRA基因保守序列>gi|568815594:54288901-54289300段碱基的外控质粒，含有matK基因保守序列>gi|11994090:c2400-2001段碱基的内控质粒；内控品为含有matK基因保守序列>gi|11994090:c2400-2001段碱基的内控质粒。

4.根据权利要求1所述的用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的试剂盒，其特征在于，试剂盒中的反应体系分为两种：

检测反应体系：包括用于检测人类PDGFRA基因D842V突变的引物和探针，内控引物和探针，AB premix，10×buffer和ddH₂O；

质控反应体系：包括外控引物和探针，内控引物和探针，AB premix，10×buffer和ddH₂O；

所述AB premix为美国应用生物系统公司产品Fast Advanced Master Mix；所述10×buffer为10倍浓度的缓冲液，缓冲液中含有Mg²⁺。