[发明专利]一种利用硫酸寡糖组鉴别北极刺参的方法

说明书

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种鉴别北极刺参的方法。

背景技术

海参富含硫酸多糖、蛋白质，皂苷、矿物质，且不含胆固醇，故享有“营养宝库”之美誉。目前市场上海参种类繁多，良莠不齐，不同海参因其营养价值、口感不同而价格相差巨大。目前鉴别海参种类的方法只是传统的外观和骨片观察，误差比较大，缺乏技术水平的支持。在海参牛奶、海参饮液中，缺少分析海参的种类的方法，导致不少不良商人以次充好、以假充真欺骗消费者。而且目前市面上出现了使用海藻粉或魔芋粉制成的假海参，没有海参特有的营养成分。因此需要一种高效准确的鉴定海参品种的分析方法。

海参中含有两种独特的硫酸多糖，主要为具有岩藻糖支链的硫酸软骨素和直链岩藻聚糖硫酸酯，占海参干重的4％左右，对人体有免疫调节剂、抗凝血、控制血糖和降血脂等功效。这两种硫酸多糖结构复杂，因海参的种类和生长海域不同而有差别，可以作为鉴别海参种类的目标化合物。

采用化学方法分析海参硫酸多糖的结构，传统的方法主要采用NMR分析，但是要求硫酸多糖的纯度高、样品量大。海参硫酸多糖的分析需要进行离子交换色谱纯化、降解、凝胶柱纯化和脱盐等多步复杂的分离纯化步骤，一个样品总共需要近20天的时间才能完成。而且这些硫酸多糖分子量大、组成复杂，所以NMR吸收峰重叠，无法鉴别不同海参来源的硫酸多糖细微的结构区别。因此迫切需要一种更加快速简便、分辨率高的检测海参硫酸多糖的分析方法。

发明内容

本发明对北极刺参的硫酸寡糖进行了研究，建立了从硫酸寡糖水平对北极刺参进行鉴别的技术，从而弥补了现有技术的不足。

本发明首先提供一种用于检测北极刺参的硫酸寡糖组合，所述的寡糖组合，其中第一组合为(GalNAc)₁(Fuc)₁(SO₄)n，其中n＝1-4；第二组合为

(GalNAc)₁(Hex)₁(SO₄)n(n＝2-3)、(GalNAc)₁(GlcA)₁(Hex)₁(SO₄)n(n＝1-4)、(GalNAc)₂(GlcA)₁(Hex)₁(SO₄)n(n＝4-6)、(GalNAc)₃(GlcA)₁(Hex)₁(SO₄)n(n＝4-7)、(GalNAc)₃(GlcA)₁(Hex)₁(SO₄)n(n＝5-7)。

本发明还提供一种检测北极刺参的方法，所述方法包括以下步骤：

1)对待侧样本进行液相色谱-质谱前处理，获得待测硫酸寡糖溶液；

2)通过液相色谱-质谱联用法检验待测样本的硫酸寡糖成分，分析样本中的北极刺参成分。

所述的液相色谱-质谱前处理步骤如下：

1)固体干海参粉碎成粉末状态，加入0.1mol/L的磷酸缓冲溶液(pH 8.0，15mmol/L EDTA-Na₂、5mmol/L半胱氨酸)、碱性蛋白酶和胰蛋白酶，50℃酶解24h；将反应物沸水浴5min灭酶活后离心，取上清液；

2)取氯化十六烷基吡啶水溶液加入上述上清液中，室温静置，离心，收集沉淀；

3)将步骤2)收集的沉淀用添加了NaCl的乙醇溶液(3mol/L NaCl，86％乙醇)溶解后，加入95％乙醇，4℃下放置24h，离心后，收集沉淀，完成海参硫酸多糖的提取；

4)将海参硫酸多糖溶于0.5mol/L Na₂HPO₄溶液中，加入醋酸铜溶液和H₂O₂，60℃水浴降解3h；然后用NaOH调节溶液至pH 9.0，离心后，取上清液；

5)采用1kDa的滤膜4000×g超滤10min，收集上层的滤液，完成海参硫酸寡糖溶液的制备，待上机检测。